Kaninchen anti-Human/Affe CD20 mAb für die Durchflusszytometrie - P11836

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD20-Funktion und -Lokalisierung

• CD20 (MS4A1) ist ein B-Lymphozyten-spezifisches Membranprotein, das den für die B-Zell-Entwicklung, -Differenzierung und -Aktivierung notwendigen Calcium-Einstrom reguliert und nach B-Zell-Rezeptor-Stimulation als Komponente des speichergesteuerten Calciumkanals fungiert. Verwandte Referenzen: PMID:12920111, PMID:3925015, PMID:7684739, PMID:18474602
• CD20 gehört zur Membran-überspannenden 4A-Familie (MS4A) und wird auf der Oberfläche von B-Zellen von der Prä-B- bis zur reifen Stufe exprimiert, jedoch nicht auf Plasmazellen.
• Das Protein unterliegt alternativem Spleißen, wodurch Isoformen von etwa 33 kDa (kanonische Vollversion) und 14 kDa entstehen, was mit den in den Spezifikationen angegebenen Molekulargewichten übereinstimmt.
• CD20 unterliegt posttranslationalen Modifikationen einschließlich Phosphorylierung und Palmitoylierung, die seine Membranlokalisierung und Funktion beeinflussen können.
• Subzellulär ist CD20 ein integraler Bestandteil der Zellmembran und fungiert als mehrfach transmembranes Protein.
• Als pharmazeutisches Ziel ist CD20 das Antigen für monoklonale Antikörper, die zur Behandlung von B-Zell-Malignomen und Autoimmunerkrankungen eingesetzt werden.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen wurde gegen ein intrazelluläres Peptid (Aminosäuren 100–200 von humanem CD20) hergestellt, was darauf hindeutet, dass der Antikörper ein Epitop erkennen könnte, das in permeabilisierten Zellen zugänglich ist; für die Oberflächenfärbung sollte die Leistung an nicht-permeabilisierten vs. permeabilisierten Proben validiert werden.
• Führen Sie für die Durchflusszytometrie Titrationsexperimente durch, um die optimale Arbeitskonzentration für Ihren spezifischen Zelltyp zu bestimmen, und schließen Sie geeignete Isotypenkontrollen ein.
• Verwenden Sie B-Zelllinien (z.B. Raji, Daudi) oder periphere mononukleäre Blutzellen (PBMCs) als positive Kontrollen und Plasmazellen oder T-Zelllinien als negative Kontrollen.
• Die Kreuzreaktivität mit Javaneraffe-CD20 wurde bestätigt; die Kreuzreaktivität mit anderen Spezies sollte bei Bedarf unabhängig validiert werden.

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