ABflo®® 500 Kaninchen anti-Human/Affe CD14 monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P08571

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD14-Funktion und -Lokalisierung

• CD14, auch als My23-Antigen bezeichnet, ist ein glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-verankertes Glykoprotein und ein Mitglied der Familie der Leucin-reichen Repeats (LRR).
• Fungiert als Korezeptor für bakterielles Lipopolysaccharid (LPS). Zusammen mit LBP fängt CD14 monomeres LPS ein und überträgt es auf den LY96/TLR4-Komplex, wodurch die angeborene Immunsignalisierung ausgelöst wird. Verwandte Referenzen: PMID:1698311 PMID:23264655
• Die Downstream-Signalisierung erfordert die Adapter MyD88, TIRAP und TRAF6, was schließlich zur Aktivierung von NF-kappa-B und zur Sekretion proinflammatorischer Zytokine führt. Verwandte Referenzen: PMID:8612135
• CD14 fungiert auch als Korezeptor für TLR2:TLR6- und TLR2:TLR1-Heterodimere und erkennt diacylierte bzw. triacylierte Lipopeptide. Diese Rezeptorcluster signalisieren von der Zelloberfläche, bevor sie über einen lipid-raft-abhängigen Weg in den Golgi-Apparat internalisiert werden. Verwandte Referenzen: PMID:16880211
• Darüber hinaus bindet CD14 elektronegatives LDL (LDL(-)) und vermittelt die durch dieses modifizierte Lipoprotein ausgelöste Zytokinfreisetzung. Verwandte Referenzen: PMID:23880187
• Das Protein befindet sich vorwiegend auf der Plasmamembran, ist in Membran-Rafts angereichert und wandert in den Golgi-Apparat; eine lösliche Form wird auch in die extrazelluläre Umgebung abgegeben.
• CD14 ist stark auf der Oberfläche von Monozyten und den meisten Gewebemakrophagen exprimiert, wobei auf Granulozyten niedrigere Spuren nachweisbar sind. Verwandte Referenzen: PMID:1698311

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen deckt die extrazelluläre Domäne (aa 20-352) ab und zielt auf einen Bereich ab, der für die Ligandenbindung kritisch ist; überprüfen Sie die Reaktivität mit sowohl membrangebundenem als auch löslichem CD14 im entsprechenden Probensystem.
• Verwenden Sie als ABflo®® 500-Konjugat geeignete Laser- und Filtereinstellungen für die Durchflusszytometrie (z. B. Anregung bei 488 nm, Emission bei 500–550 nm). Titrieren Sie den Antikörper, um das Signal-Rausch-Verhältnis auf Monozyten-/Makrophagenpopulationen zu optimieren.
• Bestätigen Sie die Expression in positiven Kontrollen wie menschlichen PBMCs oder isolierten Monozyten; die Kreuzreaktivität mit Cynomolgus ermöglicht translationswissenschaftliche Studien an nicht-menschlichen Primaten.
• Für die intrazelluläre Färbung oder den Nachweis des im Golgi-Apparat lokalisierten Pools sollten Sie Permeabilisierungsschritte nach der Oberflächenmarkierung in Betracht ziehen.

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