Kaninchen anti-Human/Affe CD14 monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P08571

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD14-Funktion und -Lokalisierung

• CD14 ist ein myeloidzellspezifisches leucinreiches Glykoprotein, auch bekannt als Monozyten-Differenzierungsantigen CD14 oder My23-Antigen.
• CD14 fungiert als Schlüssel-Korezeptor für bakterielles Lipopolysaccharid (LPS) und vermittelt die angeborene Immunerkennung und -antwort. Verwandte Referenzen: PMID:1698311, PMID:23264655
• Zusammen mit LBP bindet CD14 monomeres LPS und liefert es an den LY96/TLR4-Komplex, wodurch die NF-kappa-B-Aktivierung und die Sekretion proinflammatorischer Zytokine über MyD88-, TIRAP- und TRAF6-abhängige Wege vorangetrieben werden. Verwandte Referenzen: PMID:20133493, PMID:22265692, PMID:23264655, PMID:8612135
• Darüber hinaus wirkt CD14 als Korezeptor für TLR2:TLR6- und TLR2:TLR1-Heterodimere, die jeweils diacylierte und triacylierte Lipopeptide erkennen und eine lipidraft-abhängige Signalübertragung auslösen. Verwandte Referenzen: PMID:16880211
• CD14 bindet auch elektronegatives LDL (LDL(-)) und vermittelt die durch LDL(-) induzierte Zytokinfreisetzung, was es an Entzündungen im Zusammenhang mit Atherosklerose beteiligt. Verwandte Referenzen: PMID:23880187
• Auf Proteinebene wird CD14 stark auf der Oberfläche von Monozyten und schwach auf Granulozyten nachgewiesen; es wird auch von den meisten Gewebemakrophagen exprimiert. Verwandte Referenzen: PMID:1698311
• Subzellulär befindet sich CD14 an der Zellmembran, angereichert in Membran-Rafts, und ist auch im Golgi-Apparat zu finden; eine sezernierte Form existiert ebenfalls.
• Das Protein ist ein GPI-verankertes Glykoprotein mit mehreren leucinreichen Wiederholungen und Disulfidbindungen, Merkmale, die für seine Funktion entscheidend sind.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für die Färbung per Durchflusszytometrie titrieren Sie den -konjugierten Antikörper unter Verwendung von menschlichen peripheren Blutmononukleärzellen (PBMCs) oder Cynomolgus-Affen-Leukozyten, um die optimale Verdünnung zu bestimmen.
• Da CD14 ein GPI-verankertes Membranprotein ist, verwenden Sie ein Protokoll zur Zelloberflächenfärbung; vermeiden Sie die Permeabilisierung, sofern keine intrazelluläre Färbung beabsichtigt ist, da dies raft-lokalisierte Komplexe stören könnte.
• Erwägen Sie eine Co-Färbung mit Monozyten/Makrophagen-Markern (z. B. CD16, CD163) und Viabilitätsfarbstoffen, um Monozytenpopulationen präzise zu gate-n.
• Überprüfen Sie die Kreuzreaktivität in Cynomolgus-Proben, wenn Sie zu Studien an nicht-menschlichen Primaten übergehen; die berichtete Reaktivität des Antikörpers mit Cynomolgus ermöglicht translationsrelevante Forschung.
• Da CD14 als lösliche Form abgestoßen werden kann, vermeiden Sie übermäßige Waschschritte, die locker gebundene Antikörper entfernen könnten; verwenden Sie 0,5 % BSA/PBS-Puffer für die Färbung.
• Für die Datenanalyse verwenden Sie geeignete Kompensationskontrollen bei der Verwendung von und gate-n Sie auf FSC/SSC, um Monozyten/Makrophagen-Populationen zu identifizieren.

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