Kaninchen-anti-Human-/Affen-CD14-monoklonaler Antikörper für FC – P08571

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD14

• Das Monozyten-Differenzierungsantigen CD14, auch als My23-Antigen oder myeloidzellspezifisches Leucin-reiches Glykoprotein bekannt, ist ein durch das CD14-Gen kodiertes, GPI-verankertes Glykoprotein.
• Es fungiert als Korezeptor für bakterielles Lipopolysaccharid (LPS); zusammen mit LBP bindet es monomeres LPS und überträgt es an den LY96/TLR4-Komplex, wodurch Reaktionen der angeborenen Immunität ausgelöst werden. Zugehörige Referenzen: PMID:1698311, PMID:23264655, PMID:20133493, PMID:22265692
• Es fungiert als Korezeptor für TLR2:TLR6- und TLR2:TLR1-Heterodimere als Reaktion auf diacylierte bzw. triacylierte Lipopeptide, wobei die Signalübertragung von der Zelloberfläche aus erfolgt und anschließend über Lipid-Rafts zum Golgi-Apparat transportiert wird. Zugehörige Referenz: PMID:16880211
• Es vermittelt die durch elektronegatives LDL (LDL(-)) induzierte Zytokinfreisetzung über einen alternativen Entzündungsweg. Zugehörige Referenz: PMID:23880187
• Die subzelluläre Lokalisation umfasst die Zellmembran, Membran-Rafts, den Golgi-Apparat sowie eine sezernierte lösliche Form.
• Es wird stark auf der Oberfläche von Monozyten, Makrophagen und schwach auf Granulozyten exprimiert; außerdem wird es auf Gewebemakrophagen nachgewiesen.
• Zu den wichtigen strukturellen Merkmalen gehören ein N-terminales Signalpeptid, mehrere Leucin-reiche Repeats, eine Bindungsstelle für die GPI-Verankerung und Disulfidbrücken, die für die korrekte Faltung und Funktion unerlässlich sind.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 20–352 des humanen CD14 und deckt die extrazelluläre Leucin-reiche Repeat-Domäne ab. Dieses Design spricht für eine Spezifität gegenüber der reifen, an der Oberfläche exponierten Region und sollte keine Kreuzreaktion mit dem Signalpeptid zeigen.
• Da der Antikörper direkt mit konjugiert ist, wurde er für die Durchflusszytometrie optimiert. Es sollte eine Titration des Antikörpers durchgeführt werden, um die optimale Konzentration für den jeweiligen Zelltyp zu bestimmen; außerdem sollten geeignete Isotypkontrollen einbezogen werden.
• Für den Nachweis von CD14 auf Cynomolgus-Affenzellen sollte die Reaktivität unter den spezifischen experimentellen Bedingungen validiert werden, da die Kreuzreaktivität je nach Probenvorbereitung variieren kann.
• Lösliches CD14 im Serum oder Kulturüberstand kann mit membrangebundenem CD14 konkurrieren; daher wird empfohlen, die Zellen vor der Färbung gründlich zu waschen.

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