Kaninchen anti-Human TNF-α monoklonaler Antikörper für intrazelluläre Durchflusszytometrie - P01375

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Tumornekrosefaktor-Funktion und -Lokalisierung

• Tumornekrosefaktor alpha (TNF-α), auch bekannt als Cachectin oder TNFSF2, ist ein Schlüsselzytokin der TNF-Superfamilie und existiert sowohl in einer transmembranen als auch in einer löslichen Form. Die lösliche Form entsteht durch proteolytische Spaltung des membrangebundenen Vorläufers.
• TNF-α bindet an seine Rezeptoren TNFRSF1A/TNFR1 und TNFRSF1B/TNFBR und löst Signalwege aus, die zu Apoptose, Zellüberleben, Entzündung und Immunmodulation führen. Es ist ein potenter Pyrogen, der Fieber direkt oder über IL-1-Induktion verursacht, und ist an der Induktion von Kachexie beteiligt.
• Bei rheumatoider Arthritis beeinträchtigt TNF-α die Funktion regulatorischer T-Zellen durch Hochregulierung der Proteinphosphatase 1 (PP1), die FOXP3 an Ser-418 dephosphoryliert, wodurch FOXP3 inaktiviert wird und Treg-Zellen funktionsunfähig werden. Verwandte Referenzen: PMID:23396208
• TNF-α wirkt als Vermittler des Zelltods in antikörpervermittelten Immunreaktionen, was durch seine Rolle mit BCG-stimulierten Neutrophilen und DIABLO/SMAC-Mimetika in Blasenkrebszellen veranschaulicht wird. Verwandte Referenzen: PMID:16829952, PMID:22517918, PMID:23396208
• Es fördert die Angiogenese durch synergistische Induktion der VEGF-Produktion mit IL1B und IL6. Verwandte Referenzen: PMID:12794819
• TNF-α induziert Insulinresistenz in Adipozyten durch Hemmung der insulininduzierten IRS1-Tyrosinphosphorylierung und Glukoseaufnahme, teilweise durch Abbau des GKAP42-Proteins, und fördert die Osteoklastogenese, was zum Knochenabbau beiträgt.
• Subzellulär befindet sich TNF-α an der Zellmembran, in intrazellulären Membranen und wird sezerniert. Die Form der TNF-intrazellulären Domäne (ICD) kann zusätzlich die IL12-Produktion in dendritischen Zellen induzieren.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen die Bildung von Disulfidbrücken, Glykosylierung, Myristoylierung und Phosphorylierung, die für seine Stabilität und Aktivität entscheidend sind.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen (Aminosäuren 77-233) entspricht der reifen löslichen Form von TNF-α, der die N-terminale Transmembrandomäne fehlt. Dieses Design kann die Detektion sowohl sezernierter als auch intrazellulärer Vorläuferformen begünstigen.
• Der -Konjugat ist für die Durchflusszytometrie optimiert; für die intrazelluläre Färbung sollten Sie ein Fixierungs/Permeabilisierungs-Protokoll in Betracht ziehen, das für Zytokine validiert ist. Fügen Sie geeignete Isotyp-Kontrollen hinzu und bestätigen Sie die Färbung in stimulierten vs. unstimulierten Proben.
• Führen Sie Titrationsversuche durch, um die optimale Antikörperkonzentration für Ihren spezifischen Versuchsaufbau zu bestimmen, da Färbeindizes je nach Zelltyp und Aktivierungszustand variieren können.

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