Kaninchen anti-humaner TNF-α monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie (intrazellulär) - P01375

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: TNF-α-Funktion und -Lokalisation

• Tumornekrosefaktor (TNF-α), auch bekannt als Cachectin und TNFSF2, ist ein 26 kDa Zytokin, das vom TNF-Gen auf Chromosom 6p21.3 kodiert wird.

• Hauptsächlich von Makrophagen sezerniert, wirkt TNF-α als potentes endogenes Pyrogen, das Fieber direkt und über IL-1 induziert, und ist ein Schlüsselmediator von Kachexie bei chronischen Entzündungen und Krebs.

• Es bindet an TNFRSF1A/TNFR1 und TNFRSF1B/TNFBR und löst Signalwege aus, die das Zellüberleben, die Apoptose und die Differenzierung über eine breite Palette von Zelltypen hinweg regulieren.

• Das Zytokin wird als Typ-II-Transmembranprotein synthetisiert; seine lösliche extrazelluläre Domäne wird durch TACE/ADAM17 abgespalten, was sowohl lokale juxtakrine als auch systemische endokrin-ähnliche Aktivitäten ermöglicht.

• Posttranslationale Modifikationen umfassen Glykosylierung, Disulfidbindungsbildung, Myristoylierung und Phosphorylierung, die für korrekte Faltung, Transport und Rezeptorbindung entscheidend sind.

• Bei rheumatoider Arthritis fördert TNF-α die autoimmune Entzündung, indem es die Funktion regulatorischer T-Zellen (Treg) durch PP1-vermittelte Dephosphorylierung und Inaktivierung des FOXP3-Transkriptionsfaktors beeinträchtigt (PubMed:23396208).

  Verwandte Referenzen: PMID:23396208

• TNF-α trägt zur Antikrebsimmunität bei, indem es in Kombination mit SMAC-mimetischen Medikamenten die neutrophilenabhängige Zytotoxizität gegen Blasenkrebszellen vermittelt (PubMed:16829952, PubMed:22517918).

  Verwandte Referenzen: PMID:16829952, PMID:22517918

• Es induziert synergistisch mit IL-1β und IL-6 die VEGF-Produktion, um die Angiogenese zu fördern (PubMed:12794819), und stimuliert die Osteoklastogenese, was den Knochenabbau bei entzündlichen Erkrankungen vorantreibt (By similarity).

  Verwandte Referenzen: PMID:12794819

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Da das Immunogen die extrazelluläre Domäne (Aminosäuren 77-233) umfasst, wird erwartet, dass der Antikörper sowohl die membrangebundene als auch die lösliche Form von TNF-α erkennt.
• Für die intrazelluläre Durchflusszytometrie stellen Sie sicher, dass geeignete Permeabilisierungs- und Fixierungsprotokolle verwendet werden, um Zugang zum zytoplasmatischen TNF-α zu ermöglichen; erwägen Sie die Verwendung einer bekannten positiven Kontrolle, wie z.B. aktivierte Monozyten.
• Validieren Sie den Antikörper im relevanten Probensystem; humanes Vollblut oder PBMCs, die mit LPS stimuliert wurden, können zur Induktion der TNF-α-Expression für die intrazelluläre Färbung verwendet werden.
• Da TNF-α sezerniert wird, wird während der Zellstimulation ein Proteintransportinhibitor (z.B. Brefeldin A oder Monensin) empfohlen, um intrazelluläres Protein anzureichern.
• Achten Sie darauf, unspezifische Bindung zu vermeiden, indem Sie den Antikörper titrieren und geeignete Isotypenkontrollen verwenden.

CamelBio: Ihre One-Stop-Beschaffungsbrücke

CamelBio bietet Diagnostikherstellern, Laboren und Forschungsinstituten einen One-Stop-Zugang zu IVD-Rohmaterialien, von der Konzeption bis zur Klinik. Für die TNF-α-bezogene Immunonkologie- und Entzündungsforschung liefern wir validierte Antikörperpaare, optimierte monoklonale/polyklonale Antikörper, Bulk-Hilfsreagenzien und können seltene Targets beschaffen, um Ihre Assay-Entwicklung zu unterstützen. Kontaktieren Sie uns, um Ihre Beschaffung zu optimieren und Ihren Projektzeitplan zu beschleunigen.