Kaninchen anti-Mensch Syk mAk für FC (intrazellulär) - P43405

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Syk

• Syk (Milz-Tyrosinkinase, p72-Syk) ist eine nicht-Rezeptor-Tyrosinkinase, die die Signaltransduktion stromabwärts verschiedener Transmembranrezeptoren vermittelt, einschließlich des B-Zell-Rezeptors (BCR), und reguliert angeborene und adaptive Immunität, Zelladhäsion und Blutplättchenaktivierung. Verwandte Referenzen: PMID:12387735, PMID:33782605

• Syk ist essenziell für die B-Zellentwicklung und wird für die Reifung von B-Zellen beim Übergang von Pro-B zu Prä-B benötigt. Nach BCR-Bindung phosphoryliert es Schlüsseladapterproteine wie BLNK und BTK und initiiert so mehrere nachgeschaltete Signalkaskaden. Verwandte Referenzen: PMID:12456653

• Bei der angeborenen Immunität wird Syk durch Rezeptoren wie CLEC7A als Reaktion auf Pilzpathogene aktiviert, was zur ROS-Produktion, Inflammasomaktivierung und NF-kB-vermittelten Zytokintranskription führt.

• Syk wirkt auch in nicht-immunologischen Kontexten, einschließlich Integrin-vermittelter Zelladhäsion, Osteoklastenreifung, Blutplättchenaktivierung über Kollagen und Gefäßentwicklung. Verwandte Referenzen: PMID:12387735

• Auf subzellulärer Ebene befindet sich Syk im Zytoplasma und an der Zellmembran, wo es sich zu Signalkomplexen mit phosphorylierten ITAM-haltigen Rezeptoren oder Adapterproteinen assembliert.

• Syk wird weit verbreitet in hämatopoetischen Geweben exprimiert, insbesondere in B-Zelllinien von Pro-B bis Plasmazellen und in Neutrophilen, was seine Rolle sowohl bei adaptiven als auch angeborenen Immunantworten unterstützt. Verwandte Referenzen: PMID:8163536, PMID:15123770

• Als Kinase mit zwei SH2-Domänen katalysiert Syk die Tyrosinphosphorylierung und wird durch Phosphorylierung und Ubiquitinierung reguliert; Mutationen sind mit Immunerkrankungen und Krebserkrankungen verbunden.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Stellen Sie für die intrazelluläre Durchflusszytometrie eine ordnungsgemäße Fixierung und Permeabilisierung sicher, damit der Antikörper Zugang zu zytoplasmatischem und membrangebundenem Syk erhält. Validieren Sie das Protokoll mit einer bekannten Syk-exprimierenden Zelllinie (z. B. B-Lymphozytenlinien) und einer geeigneten Negativkontrolle.
• Da das Immunogen einer Sequenz im zentralen Bereich von menschlichem Syk (Aa 251-350) entspricht, kann dieser Antikörper beide Isoformen (p72-Syk und p70-Syk) erkennen, wenn das Epitop konserviert ist. Bestätigen Sie die Spezifität in Ihrer Probe per Western Blot oder Massenspektrometrie, wenn eine Isoformunterscheidung erforderlich ist.
• Titrieren Sie den Antikörper für einen optimalen Färbeindex in Ihrem experimentellen System. Erwägen Sie die Verwendung eines Vitalfarbstoffs, um tote Zellen auszuschließen, die den Hintergrund bei intrazellulären Assays erhöhen können.
• Fügen Sie immer eine Isotypenkontrolle hinzu, die mit dem gleichen Fluorophor konjugiert ist, um unspezifische Bindung zu bewerten.

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