Kaninchen-anti-human-Siglec-8-monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie – Q9NYZ4

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Siglec-8

• Siglec-8 ist ein sialinsäurebindendes Ig-ähnliches Lektin, auch bekannt als Mitglied 2 der Sialoadhäsin-Familie (SAF-2). Es wird vom SIGLEC8-Gen kodiert und gehört zur CD33-verwandten Siglec-Unterfamilie.
• Es fungiert als mutmaßliches Adhäsionsmolekül, das die sialinsäureabhängige Bindung an Blutzellen vermittelt. Dabei erkennt es bevorzugt α2,3-verknüpfte Sialinsäure und bindet auch an α2,6-verknüpfte Sialinsäure. Zugehörige Referenzen: PMID:10625619 PMID:10856141
• Es erkennt Epitope, die eine terminale N-Acetylneuraminsäure (Sialinsäure) und eine darunterliegende 6-O-sulfatierte Galaktose erfordern, mit einer Präferenz für Gal-6-sulfatierte Sialyl-Lewis-X-Glykane. Zugehörige Referenzen: PMID:27357658
• Die Sialinsäure-Erkennungsstelle kann durch Cis-Interaktionen mit Sialinsäuren auf derselben Zelloberfläche maskiert werden, wodurch ihre Bindungsaktivität moduliert wird.
• Es wird spezifisch auf der Oberfläche von Eosinophilen, Basophilen und Mastzellen exprimiert, was auf seine Rolle bei allergischen und entzündlichen Reaktionen hinweist.
• Es ist subzellulär in der Membran lokalisiert, was mit seiner Funktion als Transmembranrezeptor übereinstimmt.
• Es enthält ein N-terminales Signalpeptid, extrazelluläre Ig-ähnliche Domänen (Ig-ähnliche V-Typ- und C2-Typ-Domänen), eine Transmembranhelix und einen zytoplasmatischen Schwanz; es wird als Glykoprotein mit Disulfidbrücken klassifiziert.
• Aufgrund alternativen Spleißens existieren mehrere Proteinisoformen; es wurden Molekulargewichte von 44 kDa, 46 kDa und 54 kDa berichtet.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen ist ein rekombinantes Protein, das sich über die Aminosäuren 17–363 erstreckt und die extrazelluläre Region abdeckt, wodurch wahrscheinlich die Erkennung von nativem, an der Zelloberfläche exprimiertem Siglec-8 gewährleistet wird.
• Dieser Antikörper ist für die Durchflusszytometrie (FC) validiert. Erwägen Sie eine Titration von 0,1–1 μg pro Test, um die optimale Färbekonzentration für Ihre Zellpopulation zu bestimmen.
• Bei der Färbung von humanem Vollblut oder PBMCs sollten Sie einen Blockierungsschritt für Fc-Rezeptoren und geeignete Isotypkontrollen einschließen, um die unspezifische Bindung zu minimieren.
• Überprüfen Sie die Spezifität durch den Vergleich der Färbung auf Siglec-8-positiven Primärzellen (Eosinophilen, Basophilen) mit der Färbung auf Siglec-8-negativen Lymphozyten.
• Da das Epitop möglicherweise durch Cis-Interaktionen maskiert wird, sollten Sie, falls für Ihren Assay erforderlich, überprüfen, ob eine Sialidase-Behandlung der Zellen die Antikörperbindung verändert.
• Verwenden Sie ein Gate für vitale Zellen. Stellen Sie bei einer Fixierung sicher, dass die Fixierungs-/Permeabilisierungsbedingungen das vom Antikörper erkannte Epitop nicht verändern.

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