Kaninchen anti-humaner RANKL/CD254 mAb - O14788

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: RANKL/CD254-Funktion und Lokalisation

• Tumornekrosefaktor-Ligand-Superfamilienmitglied 11 (TNFSF11), auch bekannt als RANKL, OPGL, ODF, TRANCE und CD254, ist ein Typ-II-Transmembranprotein aus der TNF-Ligandenfamilie.
• Als Schlüsselregulator des Knochenstoffwechsels bindet RANKL an TNFRSF11A/RANK, um die Differenzierung und Aktivierung von Osteoklasten zu fördern, während die Interaktion mit dem Decoy-Rezeptor TNFRSF11B/OPG diesen Prozess hemmt. Es induziert Osteoklastogenese durch Ca²⁺-Oszillationen und NFATC1-vermittelte Gentranskription.
• RANKL könnte eine Rolle bei der verstärkten Knochenresorption im Rahmen des humoralen Hyperkalzämiesyndroms bei Malignomen spielen, was seine Beteiligung an pathologischem Knochenverlust unterstreicht. Verwandte Referenzen: PMID:22664871
• Über den Knochen hinaus wirkt RANKL im Immunsystem, indem es die dendritischen Zellen-vermittelte Proliferation naiver T-Zellen verstärkt, was auf eine Rolle bei T-Zell/dendritischen Zell-Interaktionen und T-Zell-abhängigen Immunantworten hindeutet.
• Subzellulär findet sich RANKL an der Zellmembran mit Transmembrantopologie, im Zytoplasma und wird auch als lösliche Form (sRANKL) sezerniert, die durch alternatives Spleißen oder proteolytisches Abschneiden entsteht.
• Die Expression ist in peripheren Lymphknoten am höchsten, mit niedrigeren Werten in Milz, peripheren Blutleukozyten, Knochenmark, Herz, Plazenta, Skelettmuskel, Magen und Schilddrüse.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Glykosylierung, und das Protein wird mit Entwicklungsprozessen, Zeldifferenzierung und Krankheitsvarianten in Verbindung gebracht, die mit Osteopetrose verknüpft sind.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für die intrazelluläre Durchflusszytometrie (FC intra) sollten Permeabilisierungs- und Fixierungsprotokolle optimiert werden, um den Antikörperzugang zum zytoplasmatischen RANKL zu gewährleisten und gleichzeitig die Epitopintegrität zu erhalten.
• Fügen Sie geeignete negative Kontrollen hinzu, wie z. B. Isotyp-kongruente Antikörper oder Zellen mit herunterregulierter TNFSF11-Expression, um die Färbespezifität zu bestätigen.
• Da RANKL membrangebunden oder sezerniert sein kann, sollte die Expression in Zelllinien oder Primärzellen bewertet werden, von denen bekannt ist, dass sie RANKL exprimieren, wie aktivierte T-Zellen oder Osteoblasten.
• Validieren Sie die Antikörperleistung in Ihrem spezifischen Probensystem, da die Epitopzugänglichkeit je nach Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen variieren kann.

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