Kaninchen anti-Human Phospho-PI3KP85α-Y467+P85β-Y464+P55γ-Y199 mAk - P27986 / O00459 / Q92569

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: PI3K-regulatorische Untereinheiten (p85α/p85β/p55γ) Funktion und Lokalisierung

• PIK3R1 kodiert die regulatorische Untereinheit p85α von PI3K, die durch alternatives Spleißen in mehreren Isoformen (p85α, p55α, p50α) existiert. Die Isoform p85α ist das全长-Protein, während kürzere Isoformen die N-terminale SH3-Domäne und die BH-Homologieregion fehlen. Dieser Antikörper erkennt phosphorylierte Formen über die drei Genprodukte PIK3R1 (p85α), PIK3R2 (p85β) und PIK3R3 (p55γ).
• Die regulatorischen Untereinheiten binden über ihre SH2-Domänen an aktivierte (phosphorylierte) Proteintyrosinkinasen und fungieren als Adaptermoleküle, die die katalytische Untereinheit p110 an die Plasmamembran rekrutieren und so die PI3K-Signalgebung aktivieren. Verwandte Referenzen: PMID:17626883 PMID:19805105 PMID:7518429
• PI3K-regulatorische Untereinheiten sind essenziell für die insulinstimulierte Glukoseaufnahme und Glykogensynthese in insulinempfindlichen Geweben wie Skelettmuskel und Leber. Sie vermitteln auch die Signalgebung stromabwärts von Wachstumsfaktorrezeptoren (FGFR1-4, PDGFR, KIT) und Integrin ITGB2. Verwandte Referenzen: PMID:17626883 PMID:7518429
• p85α moduliert die zelluläre Antwort auf Endoplasmatisches-Reticulum-(ER)-Stress, indem es die nukleäre Translokation der XBP1-Isoform 2 auf eine ER-Stress- und/oder insulinabhängige Weise fördert, insbesondere während metabolischer Überlastung in der Leber, wodurch die Glukosetoleranz verbessert wird. Verwandte Referenzen: PMID:20348923
• Die Untereinheiten p85α/p85β/p55γ sind primär zytoplasmatisch, wo sie mit der katalytischen Untereinheit p110 assoziieren. Nach Aktivierung werden sie an die Plasmamembran rekrutiert, um das PI3K-Holoenzym in die Nähe seiner Lipidsubstrate zu lokalisieren.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen die Phosphorylierung an mehreren Tyrosinresten (z. B. Y467 von p85α, Y464 von p85β, Y199 von p55γ) durch Rezeptor- und Nicht-Rezeptor-Tyrosinkinasen, was für die Regulation der PI3K-Aktivität und Protein-Protein-Interaktionen kritisch ist. Zusätzliche Modifikationen umfassen Acetylierung und Ubiquitinierung.
• Isoform 2 von PIK3R1 (p55α) ist stark in Skelettmuskel und Gehirn exprimiert, mit niedrigeren Spiegeln in Niere und Herzmuskel. Auf Proteinebene werden sowohl Isoform 2 als auch Isoform 4 (p50α) im Skelettmuskel nachgewiesen, was auf gewebsspezifische Rollen bei der Insulinsignalgebung und im Stoffwechsel hindeutet.
• Mutationen in PIK3R1 sind mit dem SHORT-Syndrom (kurzer Wuchs, Überstreckbarkeit, okulare Depression, Rieger-Anomalie und verzögerte Zahnbildung) und anderen wachstumsbedingten Störungen assoziiert, was ihre Rolle bei der Entwicklung und der insulinähnlichen Wachstumsfaktorsignalgebung unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das Y467 von humanem p85α umfasst. Stellen Sie sicher, dass Ihr experimentelles System die Phosphorylierung bewahrt – verwenden Sie Phosphatasehemmer während der Probenvorbereitung und berücksichtigen Sie Stimulationsbedingungen (z. B. Insulin, Wachstumsfaktoren), um die Detektion des Phospho-Epitops zu verbessern.
• Dieser Antikörper ist für die intrazelluläre Durchflusszytometrie (FC) validiert. Für eine optimale Färbung fixieren und permeabilisieren Sie die Zellen unter Verwendung von Protokollen, die mit der phosphospezifischen Detektion kompatibel sind (z. B. Formaldehydfixierung gefolgt von Methanolpermeabilisierung). Titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Verdünnung für Ihren Zelltyp und Ihre Behandlungsbedingungen zu ermitteln.
• Da der Antikörper Phospho-Y467 von p85α, Phospho-Y464 von p85β und Phospho-Y199 von p55γ erkennt, kann der beobachtete Molekulargewichtsbereich variieren. Beim Western Blotting (falls versucht) können Bänder zwischen 42-54 kDa (für kürzere Isoformen) und 81-84 kDa (für全长-p85α/p85β) erscheinen. Führen Sie geeignete Positivkontrollen durch (z. B. insulinstimulierte HepG2- oder HeLa-Zellen) und verifizieren Sie die Spezifität mittels Phosphatasebehandlung.
• Erwägen Sie die Verwendung dieses Antikörpers in Kombination mit Antikörpern gegen die gesamten PI3K-regulatorischen Untereinheiten, um Phosphorylierungsverhältnisse in Signalstudien zu bewerten. Für die quantitative FC stellen Sie sicher, dass der -Fluorophor mit Ihrer Zytometerkonfiguration kompatibel ist und dass Kompensationskontrollen eingeschlossen werden, wenn multiplexiert wird.
• Eine Kreuzreaktivität wird für den Menschen berichtet. Wenn Sie mit anderen Spezies arbeiten, validieren Sie die Konservierung der Ziel-Phosphostellen durch Sequenzalignment vor der Verwendung.

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