Kaninchen-monoklonaler Antikörper gegen humanes Phospho-PI3K p85α (Y467)/p85β (Y464)/p55γ (Y199) für intrazelluläre Durchflusszytometrie – P27986 / O00459 / Q92569

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation der regulatorischen PI3K-Untereinheiten (p85α/p85β/p55γ)

• Die regulatorische Untereinheit p85α der Phosphatidylinositol-3-Kinase (PI3K), kodiert von PIK3R1, ist ein Adapterprotein, das eine entscheidende Rolle bei der Vermittlung der Aktivierung des PI3K/AKT-Signalwegs spielt. Es enthält SH2- und SH3-Domänen, die an phosphorylierte Tyrosinreste aktivierter Rezeptortyrosinkinasen und Adapterproteine binden und die katalytische Untereinheit p110 an die Plasmamembran rekrutieren, wo PIP3 produziert und nachgeschaltete Signale weitergeleitet werden. Verwandte Referenzen: PMID:17626883, PMID:19805105, PMID:7518429
• Dieser Antikörper wurde entwickelt, um die phosphorylierten Formen von drei regulatorischen PI3K-Untereinheiten zu erkennen: p85α (PIK3R1), p85β (PIK3R2) und p55γ (PIK3R3), spezifisch an den konservierten Tyrosinphosphorylierungsstellen Y467 (p85α), Y464 (p85β) und Y199 (p55γ). Diese Phosphorylierungsereignisse sind mit der Aktivierung des PI3K-Signalwegs nachgeschaltet von Wachstumsfaktorrezeptoren verbunden.
• p85α ist notwendig für die insulinstimulierte Glukoseaufnahme und Glykogensynthese in insulinsensitiven Geweben und spielt eine Rolle bei der Signalgebung in Reaktion auf verschiedene Wachstumsfaktorrezeptoren (z. B. FGFR, KIT, PDGFR). Es moduliert auch die zelluläre Reaktion auf ER-Stress, indem es die nukleäre Translokation der XBP1-Isoform 2 fördert, und trägt dadurch zur Verbesserung der Glukosetoleranz bei. Verwandte Referenzen: PMID:20348923
• Subzellulär ist p85α überwiegend im Zytoplasma lokalisiert, wo es nach Stimulation mit membrangebundenen Rezeptoren interagiert.
• Isoform 2 von p85α zeigt gewebsspezifische Expression: Sie ist in Skelettmuskel und Gehirn vorhanden, in geringeren Mengen in Niere und Herzmuskel. Auf Proteinebene werden die Isoformen 2 und 4 im Skelettmuskel nachgewiesen.
• Wichtige posttranslationale Modifikationen umfassen die Phosphorylierung an Tyrosin- und Serin/Threoninresten, Acetylierung und Ubiquitinierung, die seine Stabilität und Interaktion mit Signalpartnern regulieren. p85α ist außerdem an Wirt-Virus-Interaktionen beteiligt.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Für die intrazelluläre Phospho-Durchflusszytometrie sollten Sie Fixierungs-/Permeabilisierungsprotokolle verwenden, die für die Erhaltung von Phospho-Epitopen optimiert sind. Eine Vorinkubation mit Phosphataseinhibitoren kann die Signalstabilität verbessern.
• Validieren Sie die Färbung mit geeigneten Positiv- und Negativkontrollen (z. B. unbehandelte vs. wachstumsfaktorstimulierter humane Zellen), um die Phosphospezifität zu bestätigen.
• Da dieser Antikörper direkt mit konjugiert ist, führen Sie Titrationsexperimente durch, um die optimale Konzentration für Ihren Zelltyp und Ihre experimentellen Bedingungen zu bestimmen.
• Stellen Sie sicher, dass der gewählte Fluorophor mit Ihrem Durchflusszytometrie-Panel und Ihrer Gerätekonfiguration kompatibel ist.

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