Kaninchen anti-Mensch Phospho-PI3K p85α (Y467)/p85β (Y464)/p55γ (Y199) Monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie (intrazellulär) - P27986 / O00459 / Q92569

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation der PI3K-Regulatorischen Untereinheiten (p85α/p85β/p55γ)

• Die Phosphatidylinositol-3-Kinase regulatorische Untereinheit Alpha (PIK3R1) codiert die regulatorische Untereinheit p85α, die durch alternatives Spleißen in mehreren Isoformen vorliegt, einschließlich Isoform 2, die in Skelettmuskel und Gehirn exprimiert wird, und in geringeren Mengen in Niere und Herzmuskel vorkommt.
• Enthält eine SH3-Domäne und zwei SH2-Domänen, die die Bindung an phosphorylierte Tyrosinreste an aktivierten Rezeptor-Tyrosinkinasen und Adaptorproteinen vermitteln und die katalytischen p110-Untereinheiten mit der Plasmamembran verbinden.
• Funktioniert als kritischer Adapter im PI3K/AKT-Signalweg, notwendig für die insulinstimierte Glukoseaufnahme und Glykogensynthese; wirkt auch downstream von FGFR, KIT, PDGFRA/B und ITGB2. Verwandte Referenzen: PMID:17626883, PMID:19805105, PMID:7518429
• Moduliert die Reaktion auf endoplasmatischen Retikulumstress durch Förderung der nukleären Translokation der XBP1-Isoform 2 und verbessert die hepatische Glukosetoleranz unter metabolischer Überlastung. Verwandte Referenzen: PMID:20348923
• Die regulatorischen Untereinheiten p85β (PIK3R2) und p55γ (PIK3R3) weisen strukturelle Homologie zu p85α auf und enthalten analoge Phosphorylierungsstellen, obwohl ihre Gewebeverteilung und spezifischen Funktionen variieren können.
• Schlüsselwörter aus UniProt umfassen Phosphoprotein, SH2-Domäne, SH3-Domäne, Alternatives Spleißen, Zytoplasma und Ubl-Konjugation; das Protein unterliegt Acetylierung und Ubiquitinierung.
• Die subzelluläre Lokalisation ist hauptsächlich zytoplasmatisch, wo es mit membrangebundenen Rezeptoren interagiert.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das Y467 der humanen PI3K p85α entspricht; die Kreuzreaktivität mit homologen phosphorylierten Stellen in p85β (Y464) und p55γ (Y199) ist aufgrund von Sequenzkonservierung vorgesehen, aber die Sequenzausrichtung sollte zur Berücksichtigung von Off-Target-Effekten überprüft werden.
• Für die intrazelluläre Durchflusszytometrie optimieren Sie Permeabilisierungs- und Fixierungsprotokolle, um Phospho-Epitope zu erhalten; verwenden Sie geeignete phosphospezifische Kontrollen und Stimulationsbedingungen (z. B. Serumhunger nach anschließender Wachstumsfaktorbehandlung), um die Signalspezifität zu bestätigen.
• Da der Antikörper direkt mit konjugiert ist, wird kein sekundärer Antikörper benötigt, was den Hintergrund reduziert; verwenden Sie geeignete Kompensationskontrollen bei Multiplexung mit anderen Fluorophoren.
• Erwägen Sie eine Validierung in relevanten menschlichen Zelllinien, von denen bekannt ist, dass sie PI3K-Untereinheiten exprimieren und diese Stellen nach Aktivierung von Insulin- oder Wachstumsfaktorrezeptoren phosphorylieren.

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