Kaninchen anti-Human NT5E/CD73 monoklonaler Antikörper für FC - P21589

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von NT5E/CD73

• NT5E/CD73 ist eine Ecto-5'-Nukleotidase, die die Hydrolyse von AMP zu Adenosin katalysiert und eine Schlüsselrolle im purinergen Signaling und der Adenosinproduktion spielt.
• Zeigt Substratspezifität für Ribonukleotidmonophosphate gegenüber Desoxyriboseformen mit Aktivität gegen IMP, UMP, GMP, CMP, dAMP, dCMP, dTMP, NAD und NMN. Verwandte Referenzen: PMID:21933152, PMID:22997138, PMID:23142347, PMID:34403084
• Es ist über einen GPI-Rest an die Zelloberfläche verankert und lokalisiert sich ausschließlich in der Zellmembran.
• Die aktive Stelle erfordert Zinkbindung, und das Protein bildet Disulfidbrücken, die für die strukturelle Stabilität wichtig sind.
• Mehrere Isoformen werden durch alternatives Spleißen produziert, was möglicherweise die enzymatische Aktivität oder Lokalisierung moduliert.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen N-verknüpfte Glykosylierung, was die Proteinfaltung und Funktion beeinflussen kann.
• Genetische Varianten in NT5E sind mit Verkalkungen von Gelenken und Arterien (CALJA) und anderen pathologischen Zuständen verbunden, wie durch das Schlüsselwort „Disease variant“ angegeben.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein rekombinantes Fusionsprotein, das die Aminosäuren 27–547 von humanem NT5E/CD73 enthält, was der gesamten extrazellulären Domäne entspricht. Dieses Design zielt auf das native, oberflächenexponierte Epitop ab.
• Für die Durchflusszytometrie (FC) titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Verdünnung für Ihren Zelltyp und Ihren Färbeprotokoll zu ermitteln. Fügen Sie einen Isotyp-Kontrolle und, wenn möglich, eine positive Kontrollzelllinie ein, von der bekannt ist, dass sie CD73 exprimiert.
• Da CD73 GPI-verankert ist, berücksichtigen Sie die Möglichkeit des Abschälens oder der Freisetzung in den Überstand unter bestimmten Bedingungen; fügen Sie geeignete Kontrollen hinzu, um eine spezifische Oberflächenfärbung sicherzustellen.
• Da dieser Antikörper direkt an konjugiert ist, entfällt die Notwendigkeit eines Sekundärantikörpers, was den Protokoll vereinfacht und den Hintergrund reduziert.
• Wie bei jedem Antikörper wird eine Validierung im relevanten biologischen Kontext empfohlen, insbesondere bei der Untersuchung seltener Zellpopulationen oder niedriger Expressionsniveaus.

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