Kaninchen-anti-humaner-Nectin-4-monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie – Q96NY8

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Nectin-4

• Nectin-4, auch bekannt als PVRL4, LNIR und PRR4, ist ein Rezeptor der Immunglobulin-Superfamilie, der beim Menschen durch das NECTIN4-Gen (Gene ID 81607) kodiert wird.
• Es fungiert durch trans-homophile und -heterophile Interaktionen als Zelladhäsionsmolekül, interagiert spezifisch mit NECTIN1 und dient nicht als Rezeptor für den Eintritt von Alphaherpesviren.
• Nectin-4 ist ein Mitglied der Nectin-Familie, die vier Mitglieder umfasst (Nectin-1 bis -4), die alle drei extrazelluläre Immunglobulindomänen, eine einzelne Transmembrandomäne und einen zytoplasmatischen Schwanz besitzen.
• Auf subzellulärer Ebene ist Nectin-4 an der Zellmembran und an Zellverbindungen wie Adhärenzkontakten lokalisiert; außerdem wurde eine lösliche sezernierte Form nachgewiesen.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Glykosylierung und die Bildung von Disulfidbrücken, die zu seiner strukturellen Stabilität und Funktion beitragen.
• Nectin-4 wird überwiegend in der Plazenta exprimiert und ist zwar im normalen Brustepithel nicht nachweisbar, wird jedoch im Brustkarzinom exprimiert, was auf eine Rolle in der Tumorbiologie hindeutet.
• Wichtig ist, dass Nectin-4 als zellulärer Rezeptor für das Masernvirus fungiert und dadurch den Eintritt des Virus in Wirtszellen erleichtert.
• Das Protein besitzt ein berechnetes Molekulargewicht von etwa 55 kDa; aufgrund alternativen Spleißens können verschiedene Isoformen (z. B. 24 kDa) auftreten.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht der extrazellulären N-terminalen Region (Aminosäuren 32–146) von Nectin-4, die die für Rezeptorinteraktionen wichtige erste Ig-ähnliche Domäne umfasst. Dieses Design zielt wahrscheinlich auf oberflächenexponierte Epitope ab und eignet sich daher für den durchflusszytometrischen Nachweis von nativem Nectin-4 auf lebenden Zellen.
• Da der Antikörper direkt mit konjugiert ist, wird kein Sekundärantikörper benötigt. Dadurch werden unspezifische Bindungen minimiert und das Färbeprotokoll für die Durchflusszytometrie vereinfacht.
• Für eine optimale Leistung sollte die Antikörperkonzentration für die jeweilige Zelllinie und das jeweilige Experiment titriert werden. Es empfiehlt sich, Verdünnungen im Bereich von 1:20–1:100 für 1 × 10⁶ Zellen zu testen; die tatsächlich optimale Verdünnung sollte jedoch experimentell bestimmt werden.
• Angesichts der berichteten Gewebespezifität (Plazenta, Brustkarzinom) und der subzellulären Lokalisation (Membran und Sekretionskompartiment) sollten geeignete Positivkontrollen wie Plazentagewebe und Brustkarzinom-Zelllinien (z. B. MCF-7, T47D) sowie Negativkontrollen (normales Brustepithel oder Knockout-/Knockdown-Modelle) eingesetzt werden, um die Spezifität der Färbung zu validieren.
• Da Nectin-4 als sezernierte Form abgespalten werden kann, kann der Antikörper unter bestimmten experimentellen Bedingungen (z. B. in Überständen oder Serum) lösliches Nectin-4 nachweisen. Dies sollte bei der Analyse von Durchflusszytometriedaten aus Zellkulturüberstandsproben berücksichtigt werden.
• Für die Masernvirusforschung kann dieser Antikörper zur Untersuchung der Nectin-4-Expression in Studien zu Virus-Wirt-Interaktionen eingesetzt werden. Es sollte jedoch sichergestellt werden, dass das Epitop durch die Virusbindung oder den Zelleintritt nicht maskiert wird.
• Die berichteten Molekulargewichtsbanden (24 kDa und 55 kDa) entsprechen alternativen Isoformen. Bei einer orthogonalen Validierung (z. B. mittels Western Blot) können diese Größen unter reduzierenden Bedingungen beobachtet werden.

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