Kaninchen anti-Human LAMP2 Monoklonaler Antikörper für IF/ICC und intrazelluläre FC - P13473

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: LAMP2-Funktion und -Lokalisierung

• LAMP2 (Lysosome-associated membrane glycoprotein 2), auch bekannt als CD107b, LAMP-2, LGP-96 oder LGP110, ist ein stark glycosyliertes Transmembranprotein, das durch das LAMP2-Gen kodiert wird. Durch alternatives Spleißen entstehen drei Hauptisoformen: LAMP-2A, LAMP-2B und LAMP-2C, die sich in ihren zytosolischen Enden unterscheiden und unterschiedliche Gewebeverteilungen aufweisen.
• Als wichtiges lysosomales Membran-Glykoprotein spielt LAMP2 eine wesentliche Rolle bei der Lysosomenbiogenese und der pH-Regulation, indem es als direkter Inhibitor des Protonenkanals TMEM175 wirkt und so die Ansäuerung der Lysosomen und die optimale Hydrolaseaktivität fördert. Verwandte Referenzen: PMID:37390818
• LAMP2 ist ein zentraler Mediator der chaperon-vermittelten Autophagie (CMA), einem selektiven Abbauweg. Es bindet an zytosolische Chaperon-Komplexe (z. B. HSPA8/HSC70), die Zielproteine wie GAPDH, GPX4, NLRP3 und MLLT11 zur lysosomalen Membran bringen, wo LAMP2 als Rezeptor fungiert, um die Substrate in das Lysosom für den Abbau zu translozieren. Verwandte Referenzen: PMID:11082038, PMID:18644871, PMID:24880125, PMID:36586411
• LAMP2 ist für die Fusion von Autophagosomen mit Lysosomen während der Makroautophagie erforderlich; Zellen, die LAMP2 fehlen, können STX17 nicht auf Autophagosomen ansammeln, was die Fusion verhindert und den Abbau von autophagischem Frachtgut beeinträchtigt. Verwandte Referenzen: PMID:27628032
• LAMP2 erleichtert die effiziente MHC-Klasse-II-vermittelte Präsentation exogener Antigene, indem es den lysosomalen Abbau und die anschließende Beladung von antigenen Peptiden auf neu gebildete MHC-II-Moleküle ermöglicht, obwohl es für die endogene Antigenpräsentation entbehrlich ist. Verwandte Referenzen: PMID:15894275, PMID:20518820
• Subzellulär lokalisiert sich LAMP2 hauptsächlich an der lysosomalen Membran, findet sich aber auch in endosomalen, autophagosomalen und Plasmamembranen, was sein dynamisches Trafficking und seine Funktionen in endolysosomalen und autophagischen Wegen widerspiegelt.
• Es werden isoformspezifische Expressionsmuster beobachtet: LAMP-2A ist hochexprimiert in Plazenta, Lunge und Leber, während LAMP-2B und LAMP-2C unterschiedliche Verteilungen in Geweben wie Milz, Thymus, Gehirn und Dünndarm zeigen. Verwandte Referenzen: PMID:26856698, PMID:7488019
• Bemerkenswert ist, dass LAMP2 mit der Danon-Krankheit, einer Glykogenspeicherkrankheit, assoziiert ist, und ihre Studie Schlüsselwörter wie alternatives Spleißen, Autophagie, Disulfidbrücke, Glykoprotein und Transmembranhelix umfasst.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 29-375 von humanem LAMP2 und deckt einen großen luminalen Bereich ab, der allen Isoformen gemeinsam ist; diese breite Abdeckung unterstützt die Detektion mehrerer LAMP2-Varianten, wo die Sequenzhomologie dies zulässt.
• Der Antikörper ist direkt an konjugiert, was eine Einfachfärbung für Immunfluoreszenz (IF/ICC) und intrazelluläre Durchflusszytometrie (FC intra) ohne die Notwendigkeit von Sekundärantikörpern ermöglicht.
• Für die intrazelluläre Durchflusszytometrie sind Fixierung und Permeabilisierung erforderlich; verwenden Sie Standardprotokolle (z. B. Fixierung mit 4 % PFA gefolgt von Permeabilisierung mit Saponin oder Triton X-100) und optimieren Sie Inkubationszeiten und Antikörperkonzentrationen für Ihren spezifischen Zelltyp.
• Validieren Sie die Antikörperleistung im relevanten biologischen System (Human) und fügen Sie geeignete positive und negative Kontrollen (z. B. Wildtyp- gegenüber LAMP2-knockdown-Zellen) hinzu, um die Spezifität zu bestätigen.
• Da LAMP2 stark glycosyliert ist und in mehreren Isoformen vorliegt, kann das scheinbare Molekulargewicht im Western Blot vom vorhergesagten 44-45 kDa abweichen; Tests per WB sind nicht aufgeführt, daher sollten bei Bedarf Pilotexperimente durchgeführt werden, um die Detektionsfähigkeit zu verifizieren.

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