Kaninchen-anti-humaner KIR2DL2/KIR2DL3-monoklonaler Antikörper für IF/ICC und FC - P43628

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von KIR2DL2/KIR2DL3

• Die Zielproteine KIR2DL2 und KIR2DL3 gehören zur Familie der Killerzell-Immunglobulin-ähnlichen Rezeptoren (KIR). Die folgenden funktionellen Details stammen aus der Charakterisierung von KIR2DL3 (UniProt P43628).
• KIR2DL3, auch bekannt als CD158b, NKAT2 und p58-NK-Rezeptor, ist ein inhibitorischer Rezeptor, der auf natürlichen Killerzellen (NK-Zellen) exprimiert wird.
• Es bindet spezifisch an HLA-C-Allele (HLA-Cw1, HLA-Cw3 und HLA-Cw7), wodurch die Aktivität der NK-Zellen unterdrückt und die Lyse der Zielzellen verhindert wird.
• Der Rezeptor ist ein Transmembranprotein, das in der Zellmembran lokalisiert ist, und wird aufgrund seiner strukturellen Merkmale als Typ-I-Einfachpass-Membranglykoprotein klassifiziert.
• Strukturell enthält es Immunglobulin-ähnliche Domänen und benötigt Disulfidbindungen für eine korrekte Faltung, wie durch seine Protein-Schlüsselwörter angezeigt wird.
• Alternatives Spleißen des KIR2DL3-Gens erzeugt mehrere Isoformen, die Variationen in der Ligandenspezifität oder Signalübertragungskapazität aufweisen können.
• Darüber hinaus unterliegt es posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Glykosylierung, die bei Immunrezeptoren häufig vorkommt und die Expression an der Zelloberfläche beeinflusst.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die extrazelluläre Domäne (AS 22-245) von KIR2DL3, die wahrscheinlich native Epitope präsentiert, die für die Erkennung von KIR2DL2 und KIR2DL3 auf der Zelloberfläche geeignet sind.
• Für die Durchflusszytometrie (FC) macht das direkte -Konjugat den Nachweis durch einen Sekundärantikörper überflüssig, wodurch der Hintergrund reduziert und das Färbeprotokoll vereinfacht wird. Bei der Kombination mit anderen Fluorophoren ist eine geeignete Kompensation sicherzustellen.
• Bei der Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollten die Fixierungs- und Permeabilisierungsschritte entsprechend der Lokalisation des Zielproteins in der Plasmamembran optimiert werden. Zur Detektion der an der Zelloberfläche lokalisierten Rezeptoren kann eine Färbung ohne Permeabilisierung verwendet werden.
• Angesichts der eingeschränkten Expression des Rezeptors auf NK-Zellen und einigen T-Zell-Subpopulationen sollte zur ersten Validierung eine geeignete Positivkontrolle wie humane mononukleäre Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) oder NK-Zelllinien verwendet werden.
• Die Leistung des Antikörpers kann je nach Probenvorbereitungsmethode variieren. Titrieren Sie den Antikörper (z. B. 0,1-1 µg/ml), um die optimale Arbeitskonzentration für Ihren spezifischen Assay zu bestimmen.
• Aufgrund der Sequenzhomologie wird eine Kreuzreaktivität mit humanem KIR2DL2 erwartet. Bestätigen Sie jedoch bei Bedarf die Spezifität in Ihrem Modellsystem mithilfe geeigneter Knockout- oder Knockdown-Kontrollen.

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