Kaninchen anti-Human IgG (Fc) Monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P01857

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von IgG (Fc)

• Das Ziel ist die konstante Region (Fc) der schweren Kette von humanem Immunglobulin Gamma-1 (IgG1), kodiert durch das IGHG1-Gen, entsprechend den Aminosäuren 100-330 des reifen Proteins (UniProt P01857). Diese Region vermittelt Effektorfunktionen durch die Interaktion mit Fc-Rezeptoren und Komplement.
• Schwere Immunglobulinketten sind integraler Bestandteil der adaptiven Immunität: Membranebundenes Ig dient als B-Zell-Rezeptor, während sezernierte Antikörper Pathogene neutralisieren. Die Fc-Region von IgG1 löst spezifisch die antikörperabhängige zelluläre Zytotoxizität, die komplementabhängige Zytotoxizität und die Phagozytose aus (PubMed:17576170, PubMed:20176268, PubMed:22158414). Verwandte Referenzen: PMID:17576170 PMID:20176268 PMID:22158414
• IgG1 besteht aus zwei identischen schweren Ketten, die durch Disulfidbrücken mit zwei leichten Ketten verbunden sind; jede schwere Kette enthält eine variable Domäne (kodiert durch V-, D-, J-Segmente) und drei konstante Domänen (CH1, CH2, CH3). Die CH2- und CH3-Domänen bilden das Fc-Fragment, das von diesem Antikörper erkannt wird.
• Das IGHG1-Gen ist Teil des Locus der schweren Immunglobulinkette auf Chromosom 14, und das Klassenwechsel-Rekombinationsereignis von IgM/IgD zu IgG1 findet in aktivierten B-Zellen statt und formt das Antikörper-Repertoire.
• IgG1 ist der am häufigsten vorkommende Antikörper-Isotyp im menschlichen Serum und entscheidend für die langfristige humorale Immunität, oft als Gerüst für therapeutische Antikörper verwendet.
• Subzelluläre Lokalisierung: IgG1-schwere Ketten werden als Antikörper sezerniert oder auf der Oberfläche von B-Zellen als membranebundene Immunglobuline (transmembrane Form) präsentiert.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen die Bildung von Disulfidbrücken und N-Glykosylierung an der konservierten CH2-Domäne, was für die Bindung an Fc-Rezeptoren und die Stabilität essentiell ist.
• Schlüsselwörter: adaptive Immunität, sezerniert, Zellmembran, Glykoprotein, Immunglobulin-Domäne, Disulfidbrücke.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der Antikörper ist an konjugiert, einen photostabilen Fluorophor mit Anregungs-/Emissionsmaxima bei ca. 590/617 nm, kompatibel mit Standard-Durchflusszytometern. Stellen Sie geeignete Geräteeinstellungen und Kompensationen sicher.
• Titrieren Sie für die Durchflusszytometrie den Antikörper, um die optimale Färbekonzentration zu bestimmen (typischerweise 0,5-5 µg pro 10^6 Zellen), unter Verwendung von positiven und negativen Kontrollzellen, die humanes IgG exprimieren (z. B. menschliche B-Zellen oder Zelllinien, die membranebundenes IgG exprimieren).
• Da der Antikörper die Fc-Region erkennt, kann er an freies IgG im Serum oder Kulturmedium binden; waschen Sie die Zellen gründlich, um den Hintergrund zu reduzieren.
• Dieser Klon kann zum Nachweis von Oberflächen-IgG auf menschlichen B-Zellen oder zur Identifizierung von IgG-beschichteten Partikeln oder Immunkomplexen in Forschungsanwendungen verwendet werden.
• Vermeiden Sie harte Fixierungs-/Permeabilisierungsmethoden, die das Fc-Epitop verändern könnten; eine milde Paraformaldehyd-Fixierung (1-4 %) ist im Allgemeinen kompatibel.
• Verwenden Sie Fc-Rezeptor-Blockierungsreagenzien, wenn Sie Zellen mit hoher FcγR-Expression färben, um unspezifische Bindungen zu verhindern.
• Erwägen Sie bei Bedarf die Validierung der Kreuzreaktivität mit anderen IgG-Subklassen (IgG2, IgG3, IgG4), da die Fc-Regionssequenzen eine hohe Homologie aufweisen.

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