Kaninchen anti-humaner HER2/ErbB2 monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie - P04626

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: HER2/ErbB2 Funktion und Lokalisierung

• HER2/ErbB2 ist eine Rezeptor-Tyrosin-Protein-Kinase, die in Zelloberflächenrezeptorkomplexen funktioniert und einen Korezeptor für Ligandenbindung benötigt. Es ist eine wesentliche Komponente des Neuregulin-Rezeptorkomplexes, obwohl Neureguline nicht direkt damit interagieren.
• Das Protein reguliert das Auswachsen und die Stabilisierung von Mikrotubuli über die MEMO1-RHOA-DIAPH1-Signalachse, die GSK3B hemmt und die Membranlokalisierung von APC und MACF1 fördert, was für das Einfangen von Mikrotubuli entscheidend ist.
• Im Zellkern wirkt HER2 als Transkriptionsregulator: Es bindet an den PTGS2/COX-2-Promotor, um die Transkription zu aktivieren, und beteiligt sich zusammen mit STAT3 und SRC an der transkriptionellen Aktivierung von CDKN1A.
• Es ist auch an der rRNA-Gentranskription durch RNA-Polymerase I beteiligt und fördert so die Proteinsynthese und das Zellwachstum.
• Subzellulär lokalisiert HER2 an der Zellmembran, Riffelmembran, frühen Endosomen, im Zytoplasma (perinukleäre Region) und im Zellkern, was seine dualen Signal- und Transkriptionsrollen widerspiegelt.
• Eine Expression wird in einer Vielzahl von Tumorgeweben beobachtet, darunter primärer Brustkrebs, Dünndarm-, Speiseröhren-, Nieren- und Mundkrebs, was seine onkogene Bedeutung unterstreicht.
• Zu den wichtigsten strukturellen Merkmalen gehören ein Signalpeptid, eine große extrazelluläre Domäne, eine einzelne Transmembranhelix und eine intrazelluläre Tyrosinkinasedomäne. Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung, Glykosylierung und Disulfidbindungsbildung.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper eignet sich für die Durchflusszytometrie (FC) und erkennt die extrazelluläre Domäne von humanem HER2. Verwenden Sie geeignete HER2-positive Zelllinien (z. B. SK-BR-3, BT-474) als Positivkontrolle und HER2-negative Linien (z. B. MCF-7) als Negativkontrolle.
• Für die Zelloberflächenfärbung erntet man lebende Zellen und führt die Färbung ohne Fixierung/Permeabilisierung durch, um das extrazelluläre Epitop zu erhalten. Schließen Sie eine Isotypenkontrolle und einen Fc-Block ein, um unspezifische Bindung zu minimieren.
• Titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Konzentration für Ihre spezifischen Assaybedingungen zu bestimmen; typische Startkonzentrationen liegen zwischen 0,1 und 1 µg pro Test.
• Da das Immunogen die Aminosäuren 23–652 umfasst, erkennt der Antikörper möglicherweise Isoformen, denen diese Region fehlt, oder solche mit N-terminalen Verkürzungen nicht. Validieren Sie die Expression in Ihrem Zielzellsystem, wenn alternative Isoformen verwendet werden.
• Schützen Sie das -Konjugat vor längerer Lichteinwirkung, um die Fluoreszenzstabilität zu erhalten. Lagern Sie den Antikörper wie empfohlen und vermeiden Sie wiederholte Gefrier-Tau-Zyklen.

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