Kaninchen-anti-humaner FAP-monoklonaler Antikörper für FC - Q12884

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung der prolyl-endopeptidase FAP

• Die prolyl-endopeptidase FAP (FAP) ist eine Serinprotease und ein Zelloberflächen-Glykoprotein, die auch als Fibroblastenaktivierungsprotein alpha, Seprase und 170-kDa-membrangebundene Melanom-Gelatinase bezeichnet wird. Aufgrund von alternativem Spleißen existieren mehrere Isoformen.
• FAP weist sowohl eine Endopeptidaseaktivität mit Spaltung nach Prolin als auch eine Dipeptidylpeptidaseaktivität auf. Die Endopeptidaseaktivität richtet sich gegen Substrate mit Ala/Ser-Gly-Pro-Ser/Asn/Ala-Sequenzen, wie beispielsweise Alpha-2-Antiplasmin und SPRY2. Zugehörige Referenzen: PMID:14751930, PMID:16223769, PMID:16410248
• Die Dipeptidylpeptidaseaktivität hydrolysiert Prolinbindungen in synthetischen Dipeptiden und wirkt auf natürliche Neuropeptide wie NPY, PYY, Substanz P und BNP32. Zugehörige Referenzen: PMID:10347120, PMID:10593948, PMID:16175601, PMID:21314817
• FAP baut Gelatine und hitzedenaturiertes Kollagen Typ I ab, jedoch nicht natives Kollagen der Typen I und IV, Vitronektin, Tenascin, Laminin, Fibronectin, Fibrin oder Casein, und trägt dadurch zum ECM-Umbau bei. Zugehörige Referenzen: PMID:10347120, PMID:10455171, PMID:12376466
• Durch seine Proteaseaktivitäten reguliert FAP die perizelluläre Proteolyse und fördert Zelladhäsion, Migration und Invasion. FAP spielt eine Rolle beim Gewebeumbau, bei Fibrose, Wundheilung, Entzündung und Tumorprogression, einschließlich der Förderung der Angiogenese und der Immunevasion.
• Auf subzellulärer Ebene befindet sich FAP an der Zelloberfläche und in der Zellmembran, insbesondere in Zellfortsätzen wie Lamellipodien, Invadopodien und Membrankräuselungen. Lösliche Formen werden ebenfalls in den extrazellulären Raum sezerniert und im Zytoplasma nachgewiesen.
• Die Gewebeexpression ist unter pathologischen Bedingungen weitgehend auf aktivierte Fibroblasten beschränkt: heilende Wunden, zirrhotische Leber (hepatische Sternzellen), entzündete Synovialgewebe und reaktives Stroma epithelialer Karzinome. FAP wird in Gliomzellen und Melanomzelllinien stark exprimiert, fehlt jedoch in normaler Leber. Auch Fettgewebe exprimiert FAP.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Glykosylierung und Disulfidbrückenbildung. FAP wird als Typ-II-Einfachmembranprotein mit einem Signalanker synthetisiert.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Dieser Antikörper ist für Anwendungen in der Durchflusszytometrie (FC) ausgelegt. Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 26–760 des humanen FAP und deckt die extrazelluläre Domäne ab. Das ABflo®-488-Fluorophor ermöglicht den direkten Nachweis ohne Sekundärreagenzien und reduziert dadurch den Hintergrund.
• Für die Färbung der Zelloberfläche lebender Zellen inkubieren Sie die Zellen mit dem Antikörper auf Eis in Blockierungspuffer. Für den intrazellulären oder Gesamt-FAP-Nachweis sollten Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle in Betracht gezogen werden.
• Die optimale Antikörperkonzentration sollte durch Titration im relevanten Zellsystem bestimmt werden. Verwenden Sie geeignete Isotypkontrollen und Vitalfarbstoffe, um tote Zellen von der Analyse auszuschließen.
• Da FAP auf aktivierten Fibroblasten im Tumorstroma und in heilendem Gewebe exprimiert wird, sollten geeignete positive und negative Kontrollen verwendet werden, beispielsweise FAP-positive krebsassoziierte Fibroblasten im Vergleich zu Fibroblasten aus normalem Gewebe oder FAP-negativen Zelllinien.
• Aufgrund eines möglichen Sheddings können sezernierte FAP-Formen im Überstand vorhanden sein. Für eine genaue Oberflächenfärbung sollten die Zellen vor der Färbung gründlich gewaschen werden.

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