Kaninchen-anti-Mensch Cytokeratin 8 monoklonaler Antikörper für intrazelluläre Durchflusszytometrie – P05787

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Cytokeratin 8

• Keratin 8 (K8/CK8), kodiert durch das KRT8-Gen, ist ein Typ-II-Keratin-Zwischenfilamentprotein, das obligate Heteropolymere mit seinem Typ-I-Partner KRT18 in einfachen Epithelzellen bildet (PubMed:26823019).
  Verwandte Referenzen: PMID:26823019
• KRT8 verleiht Epithelien mechanische Stabilität und Belastbarkeit und schützt Zellen vor nicht-mechanischem Stress wie Apoptose (gemäß Ähnlichkeit).
• Es wird für die ARHGEF40-vermittelte Bildung von Aktin-Stressfasern und die spannungsinduzierten Verstärkung von Stressfasern benötigt (PubMed:26823019).
  Verwandte Referenzen: PMID:26823019
• In quergestreiften Muskel können KRT8 und KRT19 die kontraktile Apparatur an den Costameren mit Dystrophin verbinden (PubMed:16000376).
  Verwandte Referenzen: PMID:16000376
• Die subzelluläre Lokalisation befindet sich überwiegend im zytoplasmatischen Zytoskelett, aber es wird auch im Nukleoplasma und der Kernmatrix nachgewiesen.
• Posttranslationelle Modifikationen umfassen Acetylierung, Phosphorylierung, Methylierung, Ubiquitinierung und Glykosylierung, die seinen Aufbau und seine Funktion modulieren.
• Gewebespezifität: exprimiert in einfachen Epithelien (z. B. Gingivalschleimhaut, harter Gaumen) und in Muskelfasern an Costameren.
• Klinische Relevanz: assoziiert mit Krankheitsvarianten und Wirts-Virus-Wechselwirkungen, was seine Rolle in der Pathologie unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für die intrazelluläre Durchflusszytometrie fixieren und permeabilisieren Sie Zellen mit optimierten Protokollen (z. B. 4 % PFA gefolgt von 0,1 % Triton X-100 oder Puffern auf Saponin-Basis), damit der Antikörper Zugang zum zytosolischen Keratinnetzwerk erhält.
• Titrieren Sie den -markierten Antikörper, um die optimale Färbekonzentration zu bestimmen; typische Startverdünnungen liegen zwischen 1:50 und 1:200, variieren aber je nach Zelltyp.
• Verwenden Sie passende Isotyp-Kontrollantikörper, um Gating-Schwellenwerte festzulegen und die Spezifität der KRT8-Färbung zu bestätigen.
• HeLa-Zellen oder andere einfache Epithelzelllinien (z. B. MCF-7) können aufgrund der hohen KRT8-Expression als Positivkontrollen dienen; falls verfügbar, sollten Sie Knockout- oder Knockdown-Zellen als Negativkontrollen verwenden.
• Schützen Sie den Antikörper vor längerer Lichteinwirkung, um ein Photobleichen des Fluorophors während der Färbung und Messung zu verhindern.
• Das Immunogen deckt fast das vollständige KRT8 (AA 1-483) ab, was darauf hindeutet, dass der Antikörper wahrscheinlich die native Konformation erkennt; eine Validierung für andere Anwendungen (z. B. WB, IHC) wurde jedoch nicht erbracht und sollte unabhängig überprüft werden.

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