Kaninchen anti-Human CD62E/E-Selectin Monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P16581

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von E-Selectin

• E-Selectin, auch bekannt als CD62E, ELAM-1 oder LECAM2, ist ein Zelloberflächen-Glykoprotein, das vom SELE-Gen kodiert wird. Es gehört zur Selektin-Familie der Adhäsionsmoleküle, die durch eine N-terminale Lektindomäne, eine EGF-ähnliche Domäne und mehrere Sushi-(Komplement-Kontrollprotein)-Wiederholungen gekennzeichnet ist.
• Die Hauptfunktion von E-Selectin besteht darin, die Adhäsion von Leukozyten an aktiviertes Endothel während Entzündungen zu vermitteln. Es erkennt und bindet an spezifische Kohlenhydratliganden, insbesondere Sialyl-Lewis X, auf Neutrophilen, Monozyten und Gedächtnis-T-Zellen.
• E-Selectin wird nicht konstitutiv exprimiert; seine Transkription wird durch Zytokine wie Tumornekrosefaktor-alpha (TNF-α) und Interleukin-1 (IL-1) induziert. Diese streng regulierte Expression gewährleistet eine schnelle und vorübergehende Adhäsionsreaktion an Orten von Verletzungen oder Infektionen.
• Über seine Rolle bei der Immunüberwachung hinaus wurde E-Selectin mit der Kapillarmorphogenese in Verbindung gebracht, was auf eine Funktion bei der Angiogenese und Gefäßremodellierung hindeutet.
• Das Protein ist ein Typ-I-Transmembran-Glykoprotein, das in der Plasmamembran verankert ist, wobei seine Ligandenbindungsdomänen auf der Zelloberfläche exponiert sind. Seine extrazelluläre Region enthält mehrere Domänen, die durch Disulfidbrücken und Kalziumbindungsstellen stabilisiert werden.
• Zu den wichtigsten strukturellen Merkmalen gehören eine N-terminale C-Typ-Lektindomäne, die für die kalziumabhängige Kohlenhydraterkennung verantwortlich ist, gefolgt von einer einzelnen epidermalen Wachstumsfaktor-(EGF)-ähnlichen Domäne und sechs kurzen Konsensuswiederholungen (Sushi-Domänen). Der kurze Zytoplasmaschwanz kann mit dem Zytoskelett und intrazellulären Signalmolekülen interagieren.
• E-Selectin unterliegt posttranslationalen Modifikationen, einschließlich N-Glykosylierung und der Bildung von Intraketten-Disulfidbrücken, die für die korrekte Faltung und die Ligandenbindungsaktivität kritisch sind.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde unter Verwendung eines Immunogens entwickelt, das der extrazellulären Region (Aminosäuren 22-230) von humanem E-Selectin entspricht, das die Lektin- und EGF-ähnlichen Domänen umfasst. Dieses Design begünstigt Epitope, die in nativen Konformationen zugänglich sind, wodurch der Klon gut für Anwendungen der Durchflusszytometrie geeignet ist.
• Für die Färbung in der Durchflusszytometrie verwenden Sie eine Einzellsuspension, die aus aktivierten Endothelzellen oder Leukozytenpopulationen hergestellt wurde. Erwägen Sie eine Titrierung des Antikörpers, um das optimale Signal-Rausch-Verhältnis für Ihr spezifisches Modellsystem zu bestimmen.
• Verwenden Sie geeignete Isotypkontrollen und eine Lebend/Tot-Diskriminierung, um die Spezifität sicherzustellen. Die Expression von E-Selectin kann auf ruhenden Zellen niedrig sein, daher wird eine Zytokinstimulation (z. B. TNF-α-Behandlung) empfohlen, um die Zielexpression hochzuregulieren.
• Das -Konjugat ist mit gängigen roten/orangen Laserlinien (z. B. 561 nm oder 594 nm) kompatibel und kann in multicolorn Panels mit anderen Fluorophoren kombiniert werden. Validieren Sie die Einstellungen zur Kompensation des spektralen Überlapps in Ihrem Instrument.
• Schützen Sie konjugierte Antikörper immer vor Licht und vermeiden Sie wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen, um die Stabilität des Fluorophors zu erhalten.

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