Kaninchen-anti-humaner CD34-monoklonaler Antikörper für IF/ICC und Durchflusszytometrie - P28906

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD34

• Das von dem CD34-Gen kodierte Antigen CD34 auf hämatopoetischen Vorläuferzellen ist ein etablierter Marker für hämatopoetische Stamm- und Vorläuferzellen und markiert außerdem das Endothel kleiner Gefäße.
• Durch alternatives Spleißen entstehen mehrere Isoformen; die kanonische Isoform hat ein berechnetes Molekulargewicht von ungefähr 41 kDa (UniProt: 40716 Da), während eine kürzere 35-kDa-Variante durch posttranslationale Prozessierung oder Unterschiede zwischen Isoformen entstehen kann.
• CD34 ist ein Typ-I-Transmembran-Glykoprotein mit einer einzelnen Transmembrandomäne, das wahrscheinlich als Adhäsionsmolekül fungiert und während der frühen Hämatopoese die Anheftung von Stammzellen an die extrazelluläre Matrix des Knochenmarks oder an Stromazellen vermittelt.
• Es kann als Gerüst für linienspezifische Glykane dienen, Kohlenhydratliganden für Selektine präsentieren und Zell-Zell-Interaktionen erleichtern.
• Die subzelluläre Lokalisation befindet sich hauptsächlich an der Zellmembran, was mit seiner Rolle bei der extrazellulären Adhäsion und Signalübertragung übereinstimmt.
• Das Protein unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, darunter N- und O-verknüpfte Glykosylierung (Glykoprotein) sowie Phosphorylierung, die seine Funktion und Bindungseigenschaften regulieren können.
• Die Expression ist hochselektiv: CD34 kommt auf hämatopoetischen Vorläuferzellen im Knochenmark und im peripheren Blut sowie auf dem Endothel kleiner Gefäße in vielen Geweben vor.
• Die extrazelluläre Region (einschließlich der als Immunogen verwendeten Aminosäuren 170–290) enthält mehrere Glykosylierungsstellen und ist auf der Zelloberfläche exponiert, wodurch sie ein zugängliches Ziel für den antikörperbasierten Nachweis darstellt.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der extrazellulären Region (AS 170–290) des humanen CD34 und gewährleistet die Erkennung des nativen Oberflächenantigens; dieser Antikörper ist für Anwendungen in IF/ICC und der Durchflusszytometrie validiert.
• Für die Immunfluoreszenzfärbung sollten Zellen angemessen fixiert und permeabilisiert werden; bei Bedarf kann zur Detektion von CD34 auf der Zelloberfläche ein nicht permeabilisierendes Protokoll verwendet werden.
• Bei der Durchflusszytometrie sollten geeignete Isotypkontrollen und Schritte zur Blockierung von Fc-Rezeptoren eingesetzt werden, um eine unspezifische Bindung zu minimieren; titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Konzentration für Ihr Zellsystem zu bestimmen.
• Die CD34-Expression ist auf bestimmte Zelltypen begrenzt; verwenden Sie gut charakterisierte Positivkontrollen (z. B. KG-1a-Zellen, HUVECs oder CD34+-hämatopoetische Vorläuferzellen) und Negativkontrollen (z. B. Lymphozyten und reife Blutzellen), um die Spezifität zu bestätigen.
• Obwohl dieses Konjugat für IF/ICC und FC entwickelt wurde, sollte der Antikörper bei der Untersuchung anderer Anwendungen (z. B. IHC oder WB) unter den entsprechenden Bedingungen validiert werden; außerdem sollten mögliche Unterschiede in der Antigenkonformation berücksichtigt werden.

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