Kaninchen anti-Mensch CD33 Monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P20138

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD33

• Das myeloische Zelloberflächenantigen CD33 (Siglec-3, gp67) ist ein Transmembranrezeptor vom Typ 1, der zur Familie der sialinsäurebindenden Immunglobulin-ähnlichen Lektine (Siglec) gehört. Es wird vom CD33-Gen kodiert.
• CD33 vermittelt Zell-Zell-Wechselwirkungen und hält Immunzellen in einem ruhenden Zustand, indem es bevorzugt alpha-2,3- und alpha-2,6-verknüpfte Sialinsäure-tragende Glykane erkennt und an diese bindet. Zugehörige Referenzen: PMID:10611343, PMID:11320212, PMID:15597323, PMID:7718872
• Nach Ligandenbindung (z. B. C1q oder sialylierte Glykoproteine) werden immunorezeptor-Tyrosin-basierte inhibitorische Motive (ITIMs) im zytoplasmatischen Schwanz durch Src-ähnliche Kinasen wie LCK phosphoryliert, wodurch Dockingstellen für die Protein-Tyrosin-Phosphatasen PTPN6/SHP-1 und PTPN11/SHP-2 entstehen. Zugehörige Referenzen: PMID:10887109, PMID:28325905, PMID:10206955, PMID:10556798
• Die rekrutierten Phosphatasen dephosphorylieren nachgeschaltete Signalmoleküle, wobei eine repressive Wirkung von Phosphoinositid-3-Kinase/PI3K abhängt. Zugehörige Referenzen: PMID:15597323
• CD33 wird überwiegend auf der Oberfläche von Zellen der monozytären und myeloischen Linie (Monozyten, Makrophagen, Granulozyten) und im Gehirn auf Mikrogliazellen exprimiert.
• Subzellulär lokalisiert sich CD33 an der Zellmembran und in Peroxisomen. Es enthält ein Signalpeptid, eine Immunglobulin-ähnliche V-Typ-Domäne und eine Transmembranhelix.
• Das Protein unterliegt alternativem Spleißen und posttranslationalen Modifikationen einschließlich Phosphorylierung, N-gekoppelter Glykosylierung und Disulfidbindungsbildung. Das vorhergesagte Molekulargewicht beträgt etwa 39,8 kDa, aber aufgrund unterschiedlicher Glykosylierung und Isoformexpression werden mehrere Banden (25 kDa, 33 kDa, 39 kDa) beobachtet.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen (Aminosäuren 18-259) umfasst die gesamte extrazelluläre Domäne von menschlichem CD33, was die Erkennung der nativen, zelloberständigen Form des Rezeptors begünstigt.
• Für die Durchflusszytometrie titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Konzentration zu bestimmen. Verwenden Sie bekannte CD33-positive Zelllinien (z. B. THP-1, U937) oder menschliche periphere Blutmonozyten als Positivkontrollen.
• Das -Konjugat ermöglicht den direkten Nachweis ohne sekundäre Reagenzien. Schützen Sie den Antikörper vor Licht und vermeiden Sie wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen, um die Fluoreszenzintensität zu erhalten.
• Wenn intrazelluläre Färbung erforderlich ist (z. B. für die peroxisomale Lokalisation), erwägen Sie Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle, die mit dem Fluorophor kompatibel sind.

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