-Kaninchen-Anti-Human-CD326/EPCAM monoklonaler Antikörper für FC - P16422

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Epithelial Cell Adhesion Molecule

• Epithelial Cell Adhesion Molecule (EPCAM), auch als CD326 bezeichnet, ist ein Typ-I-Transmembranglykoprotein und ein Mitglied der Tumor-assoziierten Kalziumsignal-Transducer-Familie.
• Es vermittelt homophile Zelladhäsion zwischen intestinalen Epithelzellen (IECs) und intraepithelialen Lymphozyten (IELs) am Mukosaepithel und bildet so eine immunologische Barriere gegen mukosale Infektionen.
• EPCAM spielt eine Rolle bei der Proliferation und Differenzierung embryonaler Stammzellen, indem es die Expression von FABP5, MYC sowie der Cycline A und E hochreguliert.
• Das Protein lokalisiert an der lateralen Zellmembran und an Tight Junctions, was mit seiner adhäsiven Funktion übereinstimmt.
• Es wird in undifferenzierten embryonalen Stammzellen hoch exprimiert, wobei die Spiegel nach Differenzierung schnell abnehmen; es ist außerdem auf fast allen epithelialen Zellmembranen vorhanden, fehlt jedoch auf mesodermalen und neuralen Zellmembranen.
• EPCAM wird häufig auf der Oberfläche von Adenokarzinomen überschritten exprimiert, was es als Tumorantigen und Ziel für Krebsdiagnostik und -therapie einstuft.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen die Bildung von Disulfidbrücken und Glykosylierung; das Protein enthält ein Signalpeptid und eine Transmembranhelix.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die extrazelluläre Domäne (Aminosäuren 24–265), was darauf hindeutet, dass der Antikörper ein auf der Zelloberfläche zugängliches Epitop erkennt, das für die Durchflusszytometrie ohne Permeabilisierung geeignet ist.
• Für die Durchflusszytometrie sollte der Antikörper titriert werden, um die optimale Konzentration für Ihr experimentelles System zu bestimmen; schließen Sie geeignete Isotypenkontrollen ein, um unspezifische Bindung zu beurteilen.
• Verwenden Sie Zentrifugation mit niedriger Geschwindigkeit und schonende Resuspension, um die Zellviabilität zu erhalten, da EPCAM ein Oberflächenantigen ist; vermeiden Sie harsche enzymatische Verdauung, die extrazelluläre Epitope spalten könnte.
• Aufgrund der Fluorophorkonjugation sollten Proben vor Licht geschützt und zeitnah analysiert werden, um Photobleichen zu minimieren.
• Validieren Sie die Reaktivität in epithelialen Zelllinien, von denen bekannt ist, dass sie EPCAM exprimieren, wie z.B. MCF-7 (Mammakarzinom) oder HT-29 (kolorektales Adenokarzinom), und beachten Sie, dass die Expressionslevel je nach Differenzierungszustand variieren können.
• Da EPCAM ein Tumorantigen ist, sollten Gating-Strategien erwogen werden, um in gemischten Proben epitheliale Zellen von nicht-epithelialen Populationen zu unterscheiden.

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