Kaninchen-anti-Mensch CD28 monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P10747

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD28

• CD28 ist ein T-zellspezifisches Oberflächenglykoprotein, das als kostimulatorischer Rezeptor dient, der für die T-Zell-Aktivierung, Proliferation, Überleben und die Aufrechterhaltung der Immunhomöostase essenziell ist. Zugehörige Referenzen: PMID:1650475 PMID:7568038
• Nach der Bindung an seine passenden Liganden CD80 oder CD86 verstärkt CD28 TCR-Signale und überträgt einzigartige intrazelluläre Signale, die die Genexpression von T-Zellen neu programmieren. Dies führt zu erhöhter Proliferation und Zytokinproduktion, insbesondere von IL-2, sowohl in CD4+ als auch in CD8+ T-Zell-Subpopulationen. Zugehörige Referenzen: PMID:12196291 PMID:24665965 PMID:35397202
• Ligandenbindung löst die Rekrutierung von Proteinkinase C-theta (PRKCQ) und GRB2 aus und aktiviert NF-kappa-B sowohl über PI3K/Akt-abhängige als auch -unabhängige Signalwege; in Verbindung mit TCR/CD3- und CD40L-Kostimulation erhöht dies die Produktion von IL-4 und IL-10. Zugehörige Referenzen: PMID:21964608 PMID:24665965 PMID:7568038 PMID:8617933
• CD28 potenziert zudem die CD40L-vermittelte Aktivierung von NF-kappa-B sowie der Kinasen MAPK8 und PAK2 in T-Zellen. Zugehörige Referenzen: PMID:15067037
• CD28 wird auf der Zelloberfläche von T-Zellen und Plasmazellen exprimiert, gehört zur Immunglobulin-Superfamilie und enthält eine einzelne Ig-ähnliche V-Typ-Domäne, eine Transmembranregion und einen zytoplasmatischen Schwanz, der nach Aktivierung phosphoryliert wird.
• Posttranslationelle Modifikationen umfassen N-verknüpfte Glykosylierung und Phosphorylierung an Tyrosinresten, die für die Signaltransduktion kritisch sind.
• Das reife Protein hat eine berechnete Molekularmasse von etwa 25 kDa (25066 Da), was mit seinem Nachweis in Western Blot- und Durchflusszytometrie-Anwendungen übereinstimmt.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Der Antikörper wurde gegen das volllängige rekombinante humane CD28-Protein (P10747) generiert. Seine Leistung wurde in der Durchflusszytometrie (FC) validiert; für andere Anwendungen sollten Nutzer individuelle Optimierungen durchführen.
• Für FC titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Färbekonzentration im jeweiligen Probensystem zu bestimmen, und verwenden Sie geeignete Isotypkontrollen sowie Fc-Blockierungsschritte, um unspezifische Bindung zu minimieren.
• Da CD28 nach Aktivierung schnell internalisiert wird, sollten Sie bei der Untersuchung aktivierter T-Zellen eine Oberflächenfärbung bei 4 °C durchführen oder einen Stoffwechselinhibitor verwenden, um ligandinduzierte Internalisierung zu verhindern.
• Bestätigen Sie die Zielspezifität, indem Sie den Antikörper mit überschüssigem rekombinantem CD28-Protein vorinkubieren, um spezifische Färbung zu blockieren.

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