Monoklonaler Kaninchen-Antikörper gegen humanes CD28 für Durchflusszytometrie und T-Zell-Stimulation – P10747

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD28

• CD28 (T-Zell-spezifisches Oberflächen-Glykoprotein CD28, auch als Tp44 bekannt) ist ein Mitglied der Immunglobulin-Superfamilie und fungiert als kostimulatorischer Rezeptor, der für die Aktivierung, Proliferation und das Überleben von T-Zellen essenziell ist.
• Die Bindung von CD28 an seine Liganden CD80 (B7-1) oder CD86 (B7-2) liefert ein entscheidendes zweites Signal, das die Signalübertragung des T-Zell-Rezeptors (TCR) verstärkt und dadurch eine erhöhte Interleukin-2-(IL-2)-Produktion sowie die Expansion von T-Zellen bewirkt. Verwandte Referenzen: PMID:1650475, PMID:12196291, PMID:35397202
• Die CD28-Signalübertragung rekrutiert die Proteinkinase C-Theta (PRKCQ) und den Adapter GRB2 und aktiviert NF-κB über PI3K/Akt-abhängige und -unabhängige Signalwege, um die Genexpression in T-Zellen zu regulieren. Verwandte Referenzen: PMID:24665965, PMID:21964608, PMID:7568038
• In Verbindung mit der TCR/CD3- und CD40L-Kostimulation steigert CD28 die Produktion der Th2-Zytokine IL-4 und IL-10 und trägt zu humoralen Immunantworten bei. Verwandte Referenzen: PMID:8617933
• CD28 wirkt synergistisch mit CD40L, um NF-κB und die nachgeschalteten Kinasen MAPK8 und PAK2 zu aktivieren, wodurch die Effektorfunktionen von T-Zellen weiter diversifiziert werden. Verwandte Referenzen: PMID:15067037
• CD28 wird überwiegend auf der Zelloberfläche von T-Zellen und Plasmazellen exprimiert, fehlt jedoch auf weniger ausgereiften B-Zellen.
• Das CD28-Protein ist ein Transmembran-Glykoprotein mit einer extrazellulären immunglobulinähnlichen Domäne, einer einzelnen Transmembranhelix und einem zytoplasmatischen Schwanz, der Signalmotive enthält. Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Disulfidbrücken, Glykosylierung und Phosphorylierung.
• Durch alternatives Spleißen entstehen mehrere CD28-Isoformen, die kostimulatorische Signale in verschiedenen T-Zell-Subpopulationen feinabstimmen können.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen, rekombinantes humanes CD28-Protein, umfasst wahrscheinlich die extrazelluläre Domäne, wodurch sich der Antikörper für den Nachweis von nativem CD28 auf der Zelloberfläche mittels Durchflusszytometrie eignet. Führen Sie eine Titration an humanen T-Zell-Linien oder PBMCs durch, um die optimale Arbeitsverdünnung zu bestimmen.
• Für die Aktivierung von T-Zellen in vitro sollte der Antikörper in Kombination mit Anti-CD3 eingesetzt werden, um kostimulatorische Signale bereitzustellen. An die Platte gebundene oder quervernetzte Formate können die Clusterbildung verstärken; Vorversuche sollten die Konzentration und Stimulationsdauer optimieren.
• Bei Verwendung dieses Antikörpers zur funktionellen Blockierung oder Depletion sollte eine Vorinkubation mit rekombinantem CD28-Protein durchgeführt werden, um die Spezifität der beobachteten Effekte zu bestätigen.
• Die Gating-Strategien für die Durchflusszytometrie sollten eine Lebend-/Tot-Diskriminierung und geeignete Isotypkontrollen umfassen, um die CD28-Expression auf T-Zell-Subpopulationen genau zu quantifizieren.
• Validieren Sie die Kreuzreaktivität in Ihrem experimentellen System. Es wird berichtet, dass der Antikörper mit humanem CD28 reagiert; eine Off-Target-Bindung sollte jedoch im jeweiligen Probenkontext ausgeschlossen werden.

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