Kaninchen anti-human Calreticulin monoklonaler Antikörper für FC (intra) - P27797

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Calreticulin-Funktion und -Lokalisierung

• Calreticulin ist ein hochkonserviertes, kalziumbindendes Chaperon, das auch als CRP55, Calregulin, ERp60, HACBP oder grp60 bekannt ist. Es ist das Produkt des CALR-Gens beim Menschen (Gen-ID: 811).
• Im endoplasmatischen Retikulum fungiert Calreticulin als ein lektinähnliches Chaperon, das die Faltung, die oligomere Assembly und die Qualitätskontrolle neusynthetisierter Glykoproteine über den Calreticulin/Calnexin-Zyklus fördert. Es interagiert vorübergehend mit fast allen monoglucosylierten Glykoproteinen, die im ER synthetisiert werden. Verwandte Referenzen: PMID:7876246
• Über das ER hinaus interagiert Calreticulin mit der DNA-bindenden Domäne des nukleären Rezeptors NR3C1 und vermittelt dessen nukleären Export, wodurch das Protein mit der transkriptionellen Regulation verknüpft wird. Verwandte Referenzen: PMID:11149926
• Calreticulin ist in die reproduktionsbiologische Forschung involviert, wo es an der Regulation der mütterlichen Genexpression teilnimmt und durch den Kalzium-Homöostase zur Oozytenreifung beitragen kann. In nicht aktivierten Oozyten ist es in kortikalen Granula vorhanden und wird während der kortikalen Reaktion exozytotisch freigesetzt, um eine Polyspermie zu verhindern.
• Subzellulär kommt Calreticulin hauptsächlich im Lumen des endoplasmatischen Retikulums vor, kann aber auch im Zytosol, im extrazellulären Raum, an der Zelloberfläche, im sarkoplasmatischen Retikulum und in sekretorischen Vesikeln wie kortikalen und zytolytischen Granula lokalisiert sein.
• Das Protein unterliegt verschiedenen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Acetylierung, Hydroxylierung und Disulfidbrückenbildung. Es verfügt über ein Signalpeptid, repetitive Motive und wird unter mehreren Stichworten kategorisiert: Chaperon, Kalzium, Metallbindung (Zink), Glykoprotein, Lektin und andere.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 335–417 des humanen Calreticulins, einer C-terminalen Region, die sich vom N-terminalen Signalpeptid und den Chaperon-Domänen unterscheidet. Dieses Design ermöglicht möglicherweise die Detektion des Gesamt-Calreticulins unabhängig vom ER-Retentions- oder Sekretionsstatus.
• Da Calreticulin hauptsächlich im ER-Lumen lokalisiert ist, erfordert die intrazelluläre Durchflusszytometrie (FC intra) eine Zellfixierung und -Permeabilisierung. Optimieren Sie die Permeabilisierungsbedingungen (z. B. unter Verwendung von Saponin oder Methanol), um den Antikörperzugang zu gewährleisten und gleichzeitig die Epitop-Reaktivität zu erhalten.
• ist ein Fluorophor im fernen roten Bereich, das eine Multiplexierung mit anderen intrazellulären Markern bei gleichzeitiger Minimierung der spektralen Überlappung ermöglicht. Titrieren Sie den Antikörper, um das optimale Signal-Rausch-Verhältnis für Ihr spezifisches experimentelles System zu bestimmen.
• Erwägen Sie die Verwendung dieses Antikörpers zur Untersuchung von ER-Stress, der Dynamik der Proteinkontrollqualität oder von Calreticulin-Translokationsereignissen in humanen Zellmodellen. Wie bei jeder intrazellulären Färbung sollten Sie geeignete Kontrollen (unstimulierte Zellen, Isotypkontrollen und Fluoreszenz-minus-eine-Kontrollen) einbeziehen, um die Spezifität zu validieren.

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