ABflo 488 Kaninchen anti-humaner C5AR1/CD88 monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie - P21730

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: C5AR1/CD88-Funktion und Lokalisierung

• C5AR1/CD88 ist ein Mitglied der Familie der G-Protein-gekoppelten Rezeptoren (GPCR) und fungiert als Rezeptor für das Anaphylatoxin C5a, ein potentes chemotaktisches und entzündungsförderndes Peptid. Verwandte Referenzen: PMID:10636859 PMID:15153520 PMID:1847994
• Nach C5a-Bindung stimuliert der Rezeptor Chemotaxis, die Freisetzung von Granula-Enzymen, die intrazelluläre Calcium-Mobilisierung und die Produktion von Superoxid-Anionen und treibt so angeborene Immunantworten an. Verwandte Referenzen: PMID:10636859 PMID:15153520 PMID:1847994
• Die Ligand-Rezeptor-Wechselwirkung umfasst zwei verschiedene Stellen: eine hochaffine Stelle am extrazellulären N-Terminus und eine zweite Stelle innerhalb der Transmembranregion, die nachgeschaltete Signalereignisse auslöst. Verwandte Referenzen: PMID:7622471 PMID:8182049 PMID:9553099
• Die Signalübertragung erfolgt hauptsächlich über die Kopplung an G(i)/G(o)-Proteine (GNAI1 oder GNAO1), was zur Hemmung der Adenylatcyclase und zur Modulation der intrazellulären cAMP-Spiegel führt. Verwandte Referenzen: PMID:36806352 PMID:37852260
• Subzellulär ist C5AR1 überwiegend in der Zellmembran lokalisiert, kann aber nach Agonisten-induzierter Internalisierung auch in zytoplasmatischen Vesikeln gefunden werden.
• Posttranslationale Modifikationen, einschließlich Glykosylierung, Phosphorylierung, Sulfatierung und Disulfidbindungsbildung, sind entscheidend für die korrekte Rezeptorfaltung, Ligandenbindung und Signaltransduktion.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der Antikörper ist ein monoklonaler Kaninchenantikörper, der an ABflo 488 konjugiert ist und so einen direkten Fluoreszenznachweis in der Durchflusszytometrie ohne sekundären Antikörper ermöglicht. Optimieren Sie die Färbeprotokolle für lebende oder fixierte humane Proben, die C5AR1 exprimieren.
• Da das Immunogen ein synthetisches Peptid innerhalb der N-terminalen Region (aa 1–100) ist, ziehen Sie die Verwendung desselben Peptids als Blockierungskontrolle in Betracht, um die Färbespezifität in Ihrem experimentellen Aufbau zu bestätigen.
• Die humane Reaktivität ist bestätigt; wenn Kreuzreaktivität mit anderen Spezies erforderlich ist, validieren Sie diese unabhängig unter Verwendung geeigneter Zelllinien oder Primärzellen.
• Als GPCR kann C5AR1 nach Ligandenstimulation einer schnellen Internalisierung unterliegen; um die Oberflächenexpression nachzuweisen, führen Sie die Färbung bei 4°C oder in Gegenwart von Natriumazid durch, um den Rezeptorumsatz zu hemmen.
• Obwohl ausschließlich für die Durchflusszytometrie validiert, könnte der Antikörper für andere Anwendungen (z. B. Immunfluoreszenz, Immunpräzipitation) bei entsprechender experimenteller Optimierung und mit geeigneten Kontrollen geeignet sein.

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