POLR2A Kaninchen pAb für WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA, ChIP - P24928

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von POLR2A

• Die DNA-gesteuerte RNA-Polymerase II-Untereinheit RPB1 (POLR2A) ist die größte und katalytische Untereinheit der RNA-Polymerase II, unverzichtbar für die Transkription proteinkodierender Gene und zahlreicher nichtkodierender RNAs. Verwandte Referenzen: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596 PMID:28108474
• Die Polymerase katalysiert die matrizengesteuerte Addition von Ribonukleotiden, deren aktives Zentrum durch Magnesiumionen koordiniert wird; sie besitzt außerdem eine 3'→5'-Exonuklease-Korrekturleseaktivität. Verwandte Referenzen: PMID:8381534 PMID:9852112
• Eine einzigartige C-terminale Domäne (CTD) mit 52 Heptapeptid-Wiederholungen wirkt als regulatorische Drehscheibe: Phosphorylierung an Ser5 erleichtert das Promotor-Escape, Ser2 fördert die Elongation und Prä-mRNA-Prozessierung. Verwandte Referenzen: PMID:24207025 PMID:26124092
• Über die DNA-abhängige Transkription hinaus kann POLR2A als RNA-abhängige RNA-Polymerase fungieren, nichtkodierende RNAs unter Verwendung einer internen Matrize verlängern und potenziell die Gen-Stummschaltung beeinflussen.
• Primär im Zellkern lokalisiert, mit Vorkommen im Zytoplasma und auf Chromosomen; posttranslationelle Modifikationen umfassen Acetylierung, Methylierung, Ubiquitinierung und Phosphorylierung.
• Mutationen in POLR2A sind mit Entwicklungsstörungen des Nervensystems verbunden; das Protein wird von Viren wie dem Hepatitis-Delta-Virus für die Replikation seines Genoms targetiert.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Für Western Blot verwenden Sie aufgrund der großen Proteingröße (217 kDa) ein 6-8%iges Polyacrylamidgel und stellen Sie einen effizienten Transfer sicher (z. B. Nass Transfer mit 10% Methanol). Eine Positivkontrolle wie HeLa- oder HEK293-Zelllysat kann in Betracht gezogen werden.
• Für IF/ICC und IHC-P sollten Fixierungs- und Antigen-Retrieval-Bedingungen optimiert werden; für intrazelluläre Kernziele kann eine Permeabilisierung mit Triton X-100 erforderlich sein.
• Für ChIP deutet die Position des Epitops am N-Terminus auf Eignung für den Nachweis von nativem POLR2A hin, dennoch wird eine Validierung mit positiven und negativen Zielgenen empfohlen.
• Als polyklonaler Antikörper ist Chargenkonsistenz zu erwarten, sollte aber in der vorgesehenen Anwendung überprüft werden.

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