PLOD3 Kaninchen mAb - O60568

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von PLOD3

• Proteinidentität und Funktion: PLOD3, auch bekannt als LH3 (Lysylhydroxylase 3), ist ein multifunktionales Enzym, das kritische posttranslationale Modifikationen an Kollagen-Lysinresten durchführt.
• Hydroxylase-Aktivität: Es katalysiert die Hydroxylierung von Lysin in -Xaa-Lys-Gly-Motiven von Prokollagenen und erzeugt so Hydroxylysin. Dieser Schritt ist essenziell für die thermische Stabilität von Kollagen und die Bildung von Quervernetzungen. Verwandte Referenzen: PMID:11956192, PMID:12475640, PMID:18298658
• Glykosyltransferase-Aktivitäten: Nach der Hydroxylierung fügt das Enzym sequenziell Galaktose und Glukose an Hydroxylysin an und bildet so 1,2-Glukosylgalactosyl-5-Hydroxylysin. Diese Glykosylierungsereignisse sind unentbehrlich für die Sekretion von Kollagen Typ IV, den Aufbau der Basalmembran und treten auch an der kollagenähnlichen Domäne von MBL1 auf. Verwandte Referenzen: PMID:12475640, PMID:18298658, PMID:18834968, PMID:10934207, PMID:11896059, PMID:11956192, PMID:25419660
• Subzelluläre Lokalisation: PLOD3 befindet sich überwiegend im Lumen und an der Membran des rauen Endoplasmatischen Retikulums (ER), ein kleiner Anteil wird in den extrazellulären Raum sezerniert. Dies stimmt mit seiner Rolle bei der Kollagenverarbeitung im Sekretionsweg überein.
• Gewebsverteilung: Ubiquitär exprimiert, mit den höchsten Gehalten in Herz, Plazenta und Pankreas, geringeren Gehalten in Lunge, Leber und Skelettmuskel. Verwandte Referenzen: PMID:9582318, PMID:9724729
• Cofaktor-Anforderungen: Die Hydroxylase-Domäne ist abhängig von Fe²⁺, 2-Oxoglutarat, O₂ und Ascorbat (Vitamin C), während die Glykosyltransferase-Aktivitäten wahrscheinlich Mn²⁺ erfordern.
• Strukturelle Merkmale: Das Enzym ist selbst ein Glykoprotein mit intramolekularen Disulfidbindungen.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Western Blotting: Unter reduzierenden und denaturierenden Bedingungen sollte eine spezifische Bande bei ca. 85 kDa beobachtet werden. Verwenden Sie eine geeignete Proteinbeladung und validieren Sie mit einem relevanten Zelllinien- oder Gewebslysat, das PLOD3 exprimiert.
• Immunhistochemie (Paraffin): Standard-Antigenreaktivierung (z. B. Citratpuffer, pH 6,0) und Blockierungsschritte werden empfohlen. Eine Optimierung der Konzentration des primären Antikörpers und des Nachweissystems wird angeraten.
• ELISA: Der Antikörper kann in direkten oder Capture-ELISA-Formaten verwendet werden. Es sollte eine Titration sowohl des beschichteten Antigens als auch der Antikörperkonzentration durchgeführt werden, um optimale Bedingungen zu ermitteln.
• Hinweise zum Immunogen: Dieser Antikörper wurde gegen ein rekombinantes Protein gerichtet, das die Aminosäuren 25–306 (N-terminale Region) umfasst. Er kann sowohl volllängen PLOD3 als auch potenzielle N-terminale Fragmente nachweisen.

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