Phospho-Vimentin-S56 Kaninchen-pAb für WB, ELISA - P08670

Kernspezifikationen und Parameter des Produkts

Biologischer Hintergrund: Vimentin-Funktion und Lokalisierung

• Vimentin ist ein Intermediärfilament-Protein vom Typ III, das durch das VIM-Gen kodiert wird, überwiegend in mesenchymalen Zellen exprimiert wird und weithin als Marker für die Epithel-Mesenchym-Transition (EMT) verwendet wird.
• Vimentin-Filamente verbinden den Zellkern, das endoplasmatische Retikulum und die Mitochondrien und spielen eine Schlüsselrolle bei der Aufrechterhaltung der Zytoarchitektur und der Erleichterung der Organellenpositionierung während der gerichteten Zellmigration.
• Vimentin interagiert mit LARP6, um Typ-I-Kollagen-mRNAs (COL1A1 und COL1A2) zu stabilisieren, was zur Produktion der extrazellulären Matrix und zur Gewebefibrose beiträgt.
• Das Protein unterliegt umfassenden posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung; die Phosphorylierung an Ser-56 (das Ziel dieses Antikörpers) ist an der Regulierung der Dynamik des Filament-Auf- und Abbaus beteiligt.
• Die subzelluläre Lokalisierung ist primär zytoplasmatisch und zytoskelettal, mit zusätzlichen Pools in der Kernmatrix, der Zellmembran und neuronalen Axonen, was seine vielfältigen funktionellen Rollen widerspiegelt.
• Die Gewebeexpression ist in Fibroblasten und bestimmten Immunzellen hoch, mit variablen Spiegeln in Krebszelllinien; Vimentin ist in metastasierenden und von Mesenchym abgeleiteten Tumoren häufig hochreguliert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Geben Sie bei der Probenvorbereitung immer Phosphatase-Inhibitoren in die Lysepuffer, um das S56-Phosphorylierungssignal zu erhalten.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität, indem Sie Proben mit λ-Phosphatase behandeln oder Phosphatase-Inhibitor-Positivkontrollen verwenden; der Signalverlust nach der Dephosphorylierung bestätigt die Phospho-Spezifität.
• Führen Sie für den Western Blot ein reduzierendes SDS-PAGE-Gel durch und übertragen Sie es auf eine PVDF- oder Nitrocellulose-Membran; die erwartete Bande liegt bei ca. 54 kDa (kann je nach Phosphorylierungsstatus leicht verschoben sein).
• Dieser Antikörper ist auch für ELISA geeignet; optimieren Sie die Beschichtungsbedingungen und Nachweisreagenzien entsprechend Ihrem spezifischen Assay-Format.
• Kreuzreaktivität wurde für Mensch und Ratte berichtet; bei Verwendung anderer Spezies führen Sie aufgrund möglicher Sequenzvariationen um die Phosphorylierungsstelle eine interne Validierung durch.

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