Phospho-Ubiquitin (Ser65) Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P62979 / P62987 / P0CG47 / P0CG48

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Ubiquitin-Funktion und -Lokalisation

• Ubiquitin ist ein hochkonserviertes 76‑Aminosäure‑Protein, das oft als Fusionsprotein mit dem ribosomalen Protein eS31 (Gen RPS27A) exprimiert und gespalten wird, um freies Ubiquitin und die ribosomale Komponente zu erzeugen.
• Ubiquitin kann über Isopeptidbindungen an Zielproteine konjugiert werden, wodurch Monomere oder Polyubiquitinketten entstehen, die über verschiedene Lysinreste verknüpft sind; Lys‑48‑verknüpfte Ketten markieren Proteine für den proteasomalen Abbau, während Lys‑63‑verknüpfte Ketten Endozytose, DNA‑Reparatur und NF‑κB‑Signalübertragung vermitteln.
• Als Teil der 40S‑ribosomalen Untereinheit ist das Ubiquitin‑Ribosomen‑Fusionsprotein an der Ribosomenbiogenese und der Vor‑rRNA‑Verarbeitung innerhalb des Nukleolus beteiligt. Verwandte Referenzen: PMID:9582194, PMID:23636399, PMID:34516797
• Ubiquitin unterliegt verschiedenen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung und ADP‑Ribosylierung, die seine zellulären Funktionen modulieren.
• Das Fusionsprotein fungiert auch als zinkbindendes ribosomales Protein und enthält eine C4‑Typ‑Zinkfinger‑Motiv.
• Die subzelluläre Lokalisation umfasst Zytoplasma, Zellkern und Nukleolus, was mit Rollen sowohl beim zytosolischen Proteinabbau als auch beim nukleären Ribosomenaufbau übereinstimmt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Aufgrund der labilen Natur der Phosphorylierung sollten während der Probenvorbereitung Phosphataseinhibitoren verwendet werden, um das Phospho‑Ser65‑Epitop zu erhalten.
• Überprüfen Sie die Antikörperspezifität durch Phosphatasebehandlung von Lysaten oder durch Wettbewerb mit einem nicht‑phosphorylierten Peptid.
• Es können mehrere Banden detektiert werden, da Ubiquitin an zahlreiche Zielproteine konjugiert ist; die vorhergesagten Molekulargewichte umfassen freies Ubiquitin (~8,5 kDa) und höhermolekulare Konjugate (beobachtete Banden bei ~15, 18, 26 und 77 kDa).
• Für die Immunfluoreszenz sollten die Fixierungs‑ und Permeabilisierungsbedingungen optimiert werden, um das Phosphorylierungssignal zu erhalten.

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