Phospho-TIFA-T9 Kaninchen pAb für WB und ELISA - Q96CG3

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: TIFA-Funktion und -Lokalisation

• TIFA (TRAF-interagierendes Protein mit FHA-Domäne enthaltendem Protein A) ist auch bekannt als T2BP, T6BP, TIFAA, PM14 und NF‑kappa‑B‑aktivierendes Protein 20. Es enthält eine Forkhead-assoziierte (FHA) Domäne, die phosphorylierungsabhängige Interaktionen vermittelt.
• TIFA dient als Adaptermolekül, das eine Schlüsselrolle bei der Aktivierung der proinflammatorischen NF‑kappa‑B-Signalgebung nach der Erkennung bakterieller Pathogen-assoziierter molekularer Muster (PAMPs) spielt. Verwandte Referenzen: PMID:12566447, PMID:15492226, PMID:26068852
• Nach Erkennung von ADP-Heptose (einem bakteriellen PAMP) durch die Kinase ALPK1 phosphoryliert ALPK1 TIFA an Thr‑9, was zu dessen Homooligomerisierung führt. Verwandte Referenzen: PMID:30111836
• Phosphoryliertes und oligomerisiertes TIFA fördert die TRAF6-Oligomerisierung und Polyubiquitinierung, die wiederum TAK1 und IKK aktivieren und die NF‑kappa‑B-vermittelte Transkription von Zytokinen antreiben.
• TIFA ist hauptsächlich im Zytoplasma lokalisiert, was zu seiner Rolle bei der Signalweiterleitung von zytoplasmatischen Pathogensensoren zu nachgeschalteten Kaskaden passt.
• Posttranslationale Modifikation: Die Phosphorylierung an Thr‑9 ist das kritische Ereignis, das die Selbstassoziation und Signalfunktion von TIFA einleitet.
• UniProt-Schlüsselwörter: 3D‑Struktur, Zytoplasma, Immunität, Angeborene Immunität, Phosphoprotein, Referenzproteom.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid, das Thr‑9 von humanem TIFA umgibt; daher wird erwartet, dass der Antikörper spezifisch die Thr‑9-phosphorylierte Form erkennt. Für Western Blots sollten Phosphataseinhibitoren während der Probenvorbereitung verwendet werden, und eine Dephosphorylierungskontrolle sollte in Betracht gezogen werden, um die Spezifität zu bestätigen.
• Für ELISA-Anwendungen kann der Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz verwendet werden; validieren Sie die Paarung mit geeigneten Sekundärantikörpern und optimieren Sie die Beschichtungsbedingungen für Ihr Antigenformat.
• Eine positive Kontrolle für die TIFA-Phosphorylierung kann durch Behandlung von Zellen mit ADP-Heptose oder Überexpression von ALPK1 erzeugt werden, was die Thr‑9-Phosphorylierung stark induziert.
• Angesichts des niedrigen Molekulargewichts von TIFA (21 kDa) verwenden Sie SDS-PAGE-Gele mit hohem Prozentanteil (12–15 %) für eine optimale Trennung und Übertragung.

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