Phospho-TBC1D4-S588 Kaninchen-pAk für WB, ELISA - O60343

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: TBC1D4-Funktion und -Lokalisierung

• TBC1D4, auch bekannt als AS160 (Akt-Substrat von 160 kDa), ist ein multidomänenhaltiges Protein, das als GTPase-aktivierendes Protein (GAP) für Rab-Proteine fungiert, einschließlich RAB2A, RAB8A, RAB10 und RAB14.
• Isoform 2 von TBC1D4 spielt eine entscheidende Rolle bei der insulinstimulierten GLUT4-Translokation zur Plasmamembran und erhöht dadurch die Glucoseaufnahme in Adipozyten und Skelettmuskelzellen.
• TBC1D4 ist ein Phosphoprotein mit mehreren Phosphorylierungsstellen; die Phosphorylierung an Ser588 ist mit der Insulinsignalgebung verbunden und reguliert seine GAP-Aktivität und Interaktion mit 14-3-3-Proteinen.
• Das Protein ist weit verbreitet exprimiert, wobei Isoform 1 stark in Skelettmuskel und Herz exprimiert wird, während Isoform 2 reichlich in Nebenniere, Schilddrüse, Lunge, Niere, Dickdarm, Gehirn und Fettgewebe vorkommt.
• In den Pankreasinseln ist die TBC1D4-Expression bei Patienten mit Typ-2-Diabetes verringert, was sie mit der Pathophysiologie des Diabetes mellitus verbindet.
• Subzellulär lokalisiert sich TBC1D4 primär im Zytoplasma, wo es mit Vesikeln und Signalkomponenten interagiert.
• Zusätzliche posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung und Methylierung, die seine Funktion weiter modulieren können.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für den Western Blot (WB) sollten Sie Zelllysate von insulinstimulierten im Vergleich zu unstimulierten Zellen verwenden, um die phosphorylierungsabhängige Detektion zu validieren; fügen Sie während der Probenvorbereitung Phosphatasehemmer hinzu.
• Aufgrund des hohen Molekulargewichts (~147 kDa) verwenden Sie einen geeigneten Gelanteil und Transferbedingungen, um eine effiziente Detektion zu gewährleisten; überprüfen Sie die Bandengröße mit einem Molekulargewichtsmarker.
• Im ELISA kann der Antikörper zum Nachweis von Phospho-Peptiden verwendet werden; fügen Sie nicht-phosphorylierte Peptidkontrollen hinzu, um die Spezifität zu bestätigen.
• Der Antikörper kreuzreagiert mit menschlichem, murinem und Ratten-TBC1D4; validieren Sie ihn im entsprechenden Spezies- und Gewebekontext unter Berücksichtigung der gewebespezifischen Expressionsprofile.
• Da es sich um einen polyklonalen Antikörper vom Kaninchen handelt, kann die Chargen-zu-Chargen-Konsistenz variieren; erwägen Sie eine erneute Validierung beim Wechsel zu einer neuen Charge.

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