Phospho-SMO-S616 Kaninchen-pAk - Q99835

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung des Proteins Smoothened

• Das Protein Smoothened (SMO), auch bekannt als Protein Gx, ist ein G-Protein-gekoppelter Rezeptor (GPCR), der als zentraler Überträger des Hedgehog-Signalwegs fungiert, essentiell für die embryonale Entwicklung und impliziert bei Krebs. Verwandte Referenzen: PMID:19592253, PMID:27437577, PMID:28344083
• SMO wird durch Cholesterinbindung bei Hedgehog-Liganden-Stimulation aktiviert, was zu einer G-Protein G(i)-vermittelten Hemmung der Adenylatzyklase und reduzierten cAMP-Spiegeln führt, wodurch wiederum GLI-Transkriptionsfaktoren freigesetzt werden, um die Expression von Zielgenen zu regulieren. Verwandte Referenzen: PMID:28344083, PMID:31168089
• Zusätzlich zur kanonischen cAMP-Modulation sequestriert und hemmt aktives SMO direkt die katalytische Untereinheit PRKACA der Proteinkinase A (PKA) an der Zellmembran und verhindert so die Phosphorylierung und Verarbeitung der GLI-Transkriptionsfaktoren. Verwandte Referenzen: PMID:36202993, PMID:39138140
• SMO erleichtert auch die Entfernung von GPR161, einem wichtigen negativen Regulator, aus der primären Zilie und sorgt so für eine robuste Wegaktivierung (Durch Ähnlichkeit). SMO lokalisiert an der Zellmembran und ist in der Membran der primären Zilie angereichert, einer subzellulären Nische, die für die Signaltransduktion kritisch ist.
• Das Protein wird posttranslational durch Phosphorylierung (einschließlich bei Ser616), Glykosylierung, Lipidierung (Cholesterinbindung) und Disulfidbrückenbildung modifiziert, wie durch Schlüsselwörter von UniProt angezeigt, und wird als an der Entwicklungssignalgebung beteiligter Transmembranrezeptor klassifiziert.
• SMO-Dysfunktion ist mit Entwicklungsstörungen und Krebs verbunden; seine Aktivität wird streng durch den stromaufwärtigen Inhibitor Patched (PTCH1/2) und den Cholesterinzugang reguliert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um Ser616 des menschlichen SMO, das die Spezifität für die phosphorylierte Form gewährleistet; die Kreuzreaktivität mit Nicht-Phospho-Formen sollte in Negativkontrollen bewertet werden.
• Für Western Blot (WB) wird eine Bande um 86 kDa erwartet; optimieren Sie Blockierung und Antikörperverdünnung, um den Hintergrund durch endogene SMO-Expression zu reduzieren.
• Verwenden Sie in ELISA und Dot Blot (DB) phosphoryliertes Peptid als Positivkontrolle und nicht-phosphoryliertes Peptid, um die Phosphorylierungsspezifität zu bestätigen; erwägen Sie Peptid-Wettbewerbsassays zur Validierung.
• Da sich SMO in Zilien lokalisiert, kann die Immunerkennung in Ganzzell-Lysaten herausfordernd sein; erwägen Sie Anreicherungsstrategien oder Immunfluoreszenz für Studien zur ziliären Lokalisierung.
• Der Antikörper ist kreuzreaktiv mit menschlichem SMO; für andere Spezies überprüfen Sie bitte die Sequenzhomologie an der Phosphorylierungsstelle vor der Verwendung.

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