Phospho-Smad5 (S463/S465) Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q99717

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Smad5-Funktion und Lokalisierung

• SMAD5 (Mothers against decapentaplegic homolog 5, auch bekannt als JV5-1, MADH5) ist ein Transkriptionsregulator aus der SMAD-Familie. Es spielt eine wesentliche Rolle bei der Embryonalentwicklung, Zelldifferenzierung, Angiogenese und Gewebehomöostase. Verwandte Referenzen: PMID:12064918 PMID:16516194

• Nach BMP-Ligandenstimulation wird SMAD5 an Ser463 und Ser465 durch aktivierte Typ-I-BMP-Rezeptoren phosphoryliert. Diese Phosphorylierung fördert seine Assoziation mit SMAD4 zur Bildung eines heteromeren Komplexes, der in den Zellkern transloziert, wo es die Genexpression durch Bindung an Smad-Bindungselemente (SBEs) in Promotorregionen reguliert. Verwandte Referenzen: PMID:9442019 PMID:33510867

• Zusätzlich zu seiner Rolle als Transkriptionsfaktor fungiert nicht-phosphoryliertes SMAD5 im Zytoplasma, um den Energiestoffwechsel zu regulieren. Es verbessert die mitochondriale Atmung und Glykolyse durch Interaktion mit Hexokinase 1 (HK1) und beschleunigt so die Glykolyse als Reaktion auf zytoplasmatische pH-Änderungen. Verwandte Referenzen: PMID:28675158

• Das Protein lokalisiert im Zytoplasma, Zellkern und Mitochondrium, was seine vielfältigen Rollen in Signalübertragung und Stoffwechsel widerspiegelt.

• SMAD5 ist ubiquitär exprimiert, was mit seiner weit verbreiteten Beteiligung an grundlegenden zellulären Prozessen übereinstimmt.

• Wichtige posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung an S463/S465 (kritisch für die Aktivierung) und Acetylierung. Das Protein enthält Zink-bindende Domänen und wurde durch direkte Proteinsequenzierung bestätigt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid, das die duale Phosphorylierungsstelle (S463/S465) umspannt. Ziehen Sie die Verwendung von Kontrollen mit nicht-phosphoryliertem Peptid-Blockierung in Betracht, um die Phosphorylierungsspezifität im Western Blot zu bestätigen.
• Für den Western Blot beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht 52 kDa. Validieren Sie das Band in relevanten humanen Zelllinien, die mit BMP-Liganden zur Induktion der Smad5-Phosphorylierung behandelt wurden. Nicht behandelte oder Phosphatase-behandelte Lysate können als negative Kontrollen dienen.
• Bei ELISA-Anwendungen titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Arbeitskonzentration zu bestimmen. Mit Phospho-Peptid beschichtete Platten können die Spezifität erhöhen.
• Da SMAD5 ubiquitär ist, stellen Sie sicher, dass die Probenvorbereitung und Ladungskontrollen über Gewebe oder Zelltypen hinweg konsistent sind.

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