Phospho-Smad2-S465/S467 + Smad3-S423/S425 Kaninchen-mAb für WB, ELISA - Q15796/P84022

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: SMAD2-Funktion und -Lokalisierung

• SMAD2 (Mothers against decapentaplegic homolog 2), auch bekannt als MADH2 oder MADR2, ist ein rezeptorreguliertes SMAD (R-SMAD), das als intrazellulärer Signaltransduktor für TGF-beta- und Aktiv-Typ-1-Rezeptorkinasen dient.
• Nach Ligandenbindung wird SMAD2 an den C-terminalen Serinresten S465/S467 phosphoryliert, was zur Komplexbildung mit SMAD4 und zur Translokation in den Zellkern führt, wo es an TRE-Elemente bindet, um die Gentranskription zu regulieren.
• Es moduliert die PDPK1-Kinaseaktivität positiv, indem es die Dissoziation vom 14-3-3-Protein YWHAQ, einem wichtigen negativen Regulator, fördert.
• SMAD2 kann als Tumorsuppressor im kolorektalen Karzinom fungieren. Verwandte Referenzen: PMID:8752209
• Subzellulär lokalisiert SMAD2 sowohl im Zytoplasma als auch im Zellkern, wobei das dynamische Shuttling durch den Phosphorylierungsstatus kontrolliert wird.
• Die Gewebeexpression ist in Skelettmuskel, Endothelzellen, Herz und Plazenta ausgeprägt.
• Posttranslationale Modifikationen wie Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung feinabstimmen die SMAD2-Aktivität und -Stabilität.
• Dieser Antikörper detektiert die Doppelphosphorylierung an S465/S467 von SMAD2 und den homologen Stellen S423/S425 von SMAD3, die beide für die Aktivierung in der TGF-beta-Signaltransduktion entscheidend sind.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der monoklonale Kaninchen-Antikörper wurde gegen ein synthetisches Phosphopeptid um S465/S467 von humanem SMAD2 hergestellt, was die Spezifität für den aktivierten, phosphorylierten Zustand gewährleistet.
• Für Western Blotting: Phosphatase-Inhibitoren in die Lysepuffer geben, um die Ziel-Phosphorylierung zu erhalten. Erwartete Hauptbanden: ~52 kDa (SMAD2) und ~48 kDa (SMAD3); zusätzliche Banden bei ~25, 35 und 43 kDa können Spaltprodukte oder Isoformen darstellen. Spezifität mit Phosphatase-behandelten Kontrollen oder siRNA-Knockdown verifizieren.
• Für ELISA: Normalisierung des Phospho-Signals auf die Gesamt-SMAD2/3-Spiegel mittels eines Pan-Antikörpers in Betracht ziehen; experimentelle Bedingungen empirisch optimieren.
• Kreuzreaktivität wurde mit humanen, murinen und ratten Proteinen beobachtet; endogene Phosphorylierungsniveaus in Ihrem experimentellen System mit geeigneter TGF-beta-Stimulation bestätigen.

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