Phospho-Smad2-S465/S467 Kaninchen pAb für WB, ELISA - Q15796

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Smad2-Funktion und -Lokalisierung

• Smad2, auch bekannt als MADH2, MADR2 oder JV18-1, ist ein Mitglied der Rezeptor-regulierten SMAD (R-SMAD)-Familie und fungiert als intrazellulärer Signaltransduktor stromabwärts von TGF-beta- und Activin-Rezeptoren.
• Nach Phosphorylierung an S465 und S467 durch Typ-1-Rezeptorkinasen bildet Smad2 einen Komplex mit Smad4, transloziert in den Zellkern und bindet an das TRE-Element, um die Transkription von TGF-beta-responsiven Genen zu regulieren.
• Smad2 fördert die TGFB1-vermittelte Transkription von Genen der odontoblastischen Differenzierung in dentalen Papillenzellen und reguliert positiv die PDPK1-Kinaseaktivität, indem es diese von YWHAQ (14-3-3-Protein) dissoziiert.
• Es kann als Tumorsuppressor bei kolorektalem Karzinom fungieren (PubMed:8752209). Verwandte Referenzen: PMID:8752209
• Die subzelluläre Lokalisation ist unter Basalbedingungen primär zytoplasmatisch, aber es shuttelt bei Aktivierung in den Zellkern, was seiner Rolle bei der Signaltransduktion entspricht.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung (entscheidend für die Aktivierung), Acetylierung und Ubiquitinierung (Ubl-Konjugation). Das Protein enthält eine zinkbindende Domäne und ist alternativ gespleißt.
• Smad2 ist stark exprimiert in Skelettmuskeln, Endothelzellen, Herz und Plazenta, was seine breite Rolle bei der Entwicklung und Gewebehomöostase widerspiegelt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid, das S465 und S467 von menschlichem Smad2 umfasst; daher erkennt der Antikörper wahrscheinlich die doppelt phosphorylierte (aktive) Form. Um die Epitopphosphorylierung zu erhalten, fügen Sie Phosphatasehemmer während der Probenvorbereitung hinzu.
• Für Western Blot (WB) verwenden Sie eine reduzierende SDS-PAGE und übertragen Sie auf PVDF; erwägen Sie die Optimierung der Blockierung und Antikörperverdünnung unter Verwendung relevanter Zelllysate, die mit TGF-beta1 behandelt wurden, oder einer Phosphatasehemmer-Kontrolle.
• Für ELISA verwenden Sie ein phosphospezifisches Nachweissystem und validieren Sie mit Peptidkompetititionsassays, um die Spezifität zu bestätigen.
• Validieren Sie die Kreuzreaktivität mit Mausproben, da eine Reaktivität vorhergesagt wird; führen Sie bei Bedarf eine artspezifische Ausrichtung des Epitops für andere Arten durch.

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