Phospho-Smad2-S465/467 + Smad3-S423/425 Kaninchen-Polyclonaler Antikörper für WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q15796 / P84022

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von SMAD2 und SMAD3

• SMAD2 ist ein rezeptorreguliertes SMAD (R-SMAD), das als intrazellulärer Signaltransduktor für TGF-beta- und Activin-Signalwege fungiert.
• Nach Ligandenbindung phosphorylieren Rezeptorkinasen Typ 1 SMAD2 am C-terminalen SSXS-Motiv (Ser465 und Ser467), was seine Aktivierung, Komplexbildung mit SMAD4 und nukleäre Translokation auslöst.
• Im Nukleus bindet der SMAD2/SMAD4-Komplex an das TGF-beta-responsive Element (TRE) in Promotoren von Zielgenen und reguliert die Transkription.
• SMAD2 kann als Tumorsuppressor bei kolorektalen Karzinomen wirken. Verwandte Referenzen: PMID:8752209
• Es ist stark exprimiert in Skelettmuskulatur, Endothelzellen, Herz und Plazenta.
• SMAD3 ist ein enges Homolog von SMAD2 und teilt ähnliche Aktivierungsmechanismen. Der Antikörper erkennt die Phosphorylierung an den entsprechenden Stellen Ser423/425 in SMAD3.
• Wichtige posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung; SMAD2 enthält außerdem eine Zinkbindungsstelle.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das auf das duale Phosphorylierungsmotiv abzielt und Spezifität für die aktivierten Formen von SMAD2 und SMAD3 bietet. Überprüfen Sie die Phosphospezifität mit phosphatasebehandelten Proben.
• Für Western Blot fügen Sie während der Lyse Phosphataseinhibitoren hinzu, um die Phosphorylierung zu erhalten, und erwägen Sie die Verwendung frischer Proben. Die vorhergesagten Molekulargewichte von SMAD2 und SMAD3 liegen bei ca. 48–52 kDa, aber aufgrund von Phosphorylierung und Isoformen können mehrere Banden auftreten.
• Für Immunfluoreszenz und Immunhistochemie ist eine Standardfixierung mit 4 % PFA und Permeabilisierung mit Triton X-100 oft geeignet; optimieren Sie die Antigenretrieval für IHC-P.
• ELISA kann für das Hochdurchsatz-Screening der Aktivierung des TGF-beta-Signalwegs verwendet werden; für Studien an mehreren Spezies ist eine Kreuzreaktivitätsprüfung empfehlenswert.
• Fügen Sie immer geeignete Positive und Negative Kontrollen hinzu (z. B. TGF-beta-behandelte vs. unbehandelte Zellen), um die Phosphospezifität zu bestätigen.

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