Phospho-Smad2 (S245/S250/S255) Kaninchen-mAk für WB und ELISA - Q15796

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: SMAD2-Funktion und -Lokalisierung

• SMAD2 (Mothers against decapentaplegic homolog 2) ist ein rezeptorreguliertes SMAD (R-SMAD), das als intrazellulärer Signaltransduktor und transkriptioneller Modulator für TGF-beta (Transforming Growth Factor) und Aktiv-Typ-1-Rezeptorkinasen fungiert.
• Nach Phosphorylierung an seinem C-terminalen SXS-Motiv (Serinreste 465 und 467) bildet SMAD2 einen Komplex mit SMAD4 und translokiert in den Zellkern, wo es an das TGF-beta-responsive Element (TRE) in den Promotoren von Zielgenen bindet, um die Transkription zu regulieren.
• SMAD2 reguliert die PDPK1-Kinaseaktivität positiv, indem es deren Dissoziation vom inhibitorischen 14-3-3-Protein YWHAQ stimuliert.
• Es wird als Tumorsuppressor beim kolorektalen Karzinom angesehen. Verwandte Referenzen: PMID:8752209
• Subzellulär pendelt SMAD2 zwischen Zytoplasma und Zellkern, was mit seiner Rolle in der Signaltransduktion übereinstimmt.
• Das Protein wird in hohen Mengen in Skelettmuskel, Endothelzellen, Herz und Plazenta exprimiert.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung, die seine Aktivität, Stabilität und Interaktionen regulieren.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen, und das Protein enthält eine Zinkionen-Bindungsdomäne (MH1-Domäne), die die DNA-Bindung vermittelt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein phosphoryliertes Peptid generiert; Probenlysepuffer sollten Phosphataseinhibitoren (z. B. Natriumorthovanadat, Natriumfluorid) enthalten, um den Phosphorylierungsstatus während der Präparation zu erhalten.
• Für Western Blotting sollten sowohl unbehandelte als auch TGF-β/Aktiv-stimulierte Zelllysate aufgetrennt werden, um aktivierungsabhängige Bandenverschiebungen zu bestätigen.
• Eine empfohlene Startverdünnung für WB ist 1:500–1:2000, die optimale Konzentration sollte jedoch empirisch in Ihrem spezifischen Probensystem bestimmt werden.
• Bei ELISA kann die Verwendung eines Blockierpuffers mit geringer Phosphataseaktivität den Hintergrund reduzieren; erwägen Sie einen Phosphopeptid-Kompetitionsassay zur Überprüfung der Spezifität.
• Als Kaninchen-monoklonaler Antikörper sollte für die Detektion ein Anti-Kaninchen-IgG (H+L)-Sekundärantikörper, konjugiert mit HRP oder AP, verwendet werden.

CamelBio: Ihre One-Stop-Beschaffungsbrücke

CamelBio arbeitet mit Diagnostikherstellern und Forschungsinstituten zusammen, um ein umfassendes Portfolio von IVD-Rohmaterialien bereitzustellen, darunter validierte Antikörperpaare, optimierte monoklonale und polyklonale Antikörper sowie Bulk-Hilfsreagenzien. Für Projekte, die auf den TGF-beta-Signalweg oder den Phospho-SMAD2-Nachweis abzielen, bietet CamelBio maßgeschneiderte Beschaffungsunterstützung, um Ihre Assay-Entwicklung vom Konzept bis zur Klinik zu beschleunigen.