Phospho-SHC1-Y427 Kaninchen pAb - P29353

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: SHC1-Funktion und -Lokalisierung

• SHC1 kodiert drei Hauptisoformen – p46Shc, p52Shc und p66Shc – die durch alternatives Spleißen und alternative Promotor-Nutzung entstehen.
• Die Isoformen p46Shc und p52Shc koppeln aktivierte Rezeptor-Tyrosinkinasen an den Ras-Signalweg, indem sie den GRB2/SOS-Komplex rekrutieren und so mitogene Signale weiterleiten.
• Die Isoform p66Shc ist nicht an der Ras-Aktivierung beteiligt, sondern vermittelt Reaktionen auf oxidativen Stress und Apoptose; sie wirkt stromabwärts von p53, um intrazelluläre Oxidantien und die Freisetzung von Cytochrom c zu erhöhen.
• SHC1 ist an der Signalübertragung des Angiopoietin-Rezeptors TEK/TIE2 beteiligt und reguliert die Migration von Endothelzellen und die sprossende Angiogenese.
• Es ist an der Oncostatin-M-vermittelten Signalübertragung über den Typ-II-OSM-Rezeptor beteiligt und trägt über die JAK1-abhängige Rekrutierung an die OSMR-Untereinheit und die Assoziation von SHC1 mit GRB2 zur Aktivierung des Ras/Raf/MAPK-Signalwegs bei. Verwandte Referenzen: PMID:11016927
• SHC1 lokalisiert im Zytoplasma, an Fokalkontakten und in der mitochondrialen Matrix, was seine vielfältigen Signalrollen widerspiegelt.
• Das Protein ist weit verbreitet exprimiert, insbesondere in neuralen Stammzellen, fehlt jedoch in reifen Neuronen.
• Wichtige posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung (es ist ein Phosphoprotein) und Acetylierung; es enthält eine SH2-Domäne, die für Protein-Protein-Interaktionen essentiell ist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um Y427, das den spezifischen Nachweis der Phosphorylierung an diesem Rest ermöglicht. Für Western Blot sollten Sie die Verwendung von Phospho-spezifischen und Gesamtprotein-Kontrollen in Betracht ziehen, um die Bandenidentität zu bestätigen.
• Validieren Sie die Antikörperleistung in relevanten humanen oder murinen Zelllinien, die mit geeigneten Wachstumsfaktoren (z.B. EGF, PDGF) stimuliert wurden, um die SHC1-Phosphorylierung zu induzieren.
• Bestätigen Sie für ELISA die Spezifität durch kompetitive Hemmung mit dem phosphorylierten gegenüber dem nicht-phosphorylierten Peptid.
• Optimieren Sie die Primärantikörper-Verdünnung und die Blockierbedingungen; eine typische Startverdünnung für WB könnte 1:500–1:2000 sein, aber eine empirische Bestimmung in Ihrem System wird empfohlen.
• Da SHC1 an mehreren Signalkaskaden beteiligt ist, interpretieren Sie die Ergebnisse im Kontext des vollständigen Signalwegs und möglicher Rückkopplungsmechanismen.

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