Phospho-Rpb1 CTD-S2/S5 Kaninchen-mAk - P24928

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung der DNA-gerichteten RNA-Polymerase-II-Untereinheit RPB1

• Die DNA-gerichtete RNA-Polymerase-II-Untereinheit RPB1 (auch bekannt als POLR2A) ist die größte und katalytische Kernkomponente der RNA-Polymerase II, die für die Synthese von mRNA-Vorstufen und vielen funktionalen nicht-kodierenden RNAs verantwortlich ist. Verwandte Referenzen: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596
• Der Transkriptionszyklus von Pol II umfasst Initiation, Elongation und Termination. Während der Initiation wird der Prä-Initiationskomplex an den Promotoren zusammengebaut; die Elongation beinhaltet die prozessive RNA-Synthese; die Termination gibt das Transkript frei. Verwandte Referenzen: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:28108474
• Das Enzym katalysiert die Nukleotidaddition über einen Zwei-Metall-Ionen-Mechanismus, wobei POLR2A ein Mg²⁺-koordinierendes DxDGD-Motiv beisteuert und POLR2B eine zusätzliche Koordination bereitstellt. Verwandte Referenzen: PMID:30190596 PMID:8381534 PMID:9852112
• Besitzt 3'→5' Exonuklease-Korrekturleseaktivität, die die Entfernung falsch eingebauter Nukleotide ermöglicht. Verwandte Referenzen: PMID:8381534
• Die einzigartige C-terminale Domäne (CTD) besteht aus 52 Heptapeptid-Wiederholungen (YSPTSPS) und unterliegt einer dynamischen Phosphorylierung, hauptsächlich an Ser2 und Ser5, was den Promoter-Austritt, die Elongation und die mRNA-Verarbeitung reguliert. Verwandte Referenzen: PMID:24207025 PMID:26124092
• Das Gleichgewicht zwischen CTD-Lysin-Acetylierung und -Methylierung steuert die Genexpression, wobei die Acetylierung die Transkription von wachstumsfaktorinduzierten Genen fördert und die Methylierung die Expression im Allgemeinen unterdrückt. Verwandte Referenzen: PMID:24207025 PMID:26124092
• Darüber hinaus kann RPB1 als RNA-abhängige RNA-Polymerase fungieren, nicht-kodierende RNAs verlängern und wirkt bei der Replikation des Hepatitis-Delta-Virus.
• Subzelluläre Lokalisierung: vorwiegend nukleär, aber auch im Zytoplasma gefunden und assoziiert mit Chromosomen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Führen Sie einen Western Blot durch, stellen Sie sicher, dass die Lysepuffer Phosphatasehemmer enthalten, um die CTD-Phosphorylierung zu erhalten. Fügen Sie eine mit Phosphatase behandelte Kontrolle ein, um die Phosphospezifität zu bestätigen.
• Für die Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP) und CUT&Tag kann dieser Antikörper helfen, die Besetzung der RNA-Polymerase II und die Ser2/Ser5-Phosphorylierungsmuster im gesamten Genom zu profilieren.
• Im ELISA kann der Antikörper verwendet werden, um Phospho-POLR2A-Spiegel in Lysaten oder gereinigten Proben zu quantifizieren.

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