Phospho-RPA2-S4/S8 Kaninchen pAb - P15927

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung der Replikationsprotein A 32 kDa-Untereinheit

• Die Replikationsprotein A 32 kDa-Untereinheit (RPA2, auch bekannt als RPA32, RP-A p32, RP-A p34) ist eine Komponente des heterotrimeren Replikationsprotein A (RPA)-Komplexes, der RPA1, RPA2 und RPA3 umfasst.
• RPA bindet und stabilisiert einzelsträngige DNA (ssDNA)-Zwischenprodukte, die während der DNA-Replikation und bei DNA-Stress entstehen, verhindert deren Rückhybridisierung und erleichtert die Rekrutierung von DNA-Metabolismusproteinen.
• In der zellulären Antwort auf DNA-Schäden ist RPA entscheidend für die DNA-Reparatur und Checkpoint-Aktivierung. Es rekrutiert den ATR-ATRIP-Kinasekomplex an DNA-Schadensstellen und initiiert so die DNA-Schadensantwort-Kaskade.
• RPA rekrutiert wichtige Reparaturfaktoren an das Chromatin, darunter RAD51 und RAD52 für die Doppelstrangbruchreparatur sowie XPA und XPG für die Nukleotidexzisionsreparatur (NER). Es ist auch über die Interaktion mit UNG an der Basenexzisionsreparatur (BER) beteiligt.
• RPA stimuliert die 5'-3'-Helikaseaktivität von BRIP1/FANCJ, die an der Interstrang-Crosslink-Reparatur beteiligt ist.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:17596542
• RPA lokalisiert hauptsächlich im Zellkern und ist in PML-Körpern zu finden, was mit seiner Rolle im DNA-Metabolismus übereinstimmt.
• RPA2 ist ein Phosphoprotein, das verschiedenen posttranslationalen Modifikationen unterliegt, einschließlich Acetylierung, Ubiquitylierung und alternatives Spleißen, die seine Funktion in der DNA-Schadenssignalgebung regulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um S4 und S8 von humanem RPA2. Für die Western-Blot-Bestätigung sollten Phosphatase-behandelte Zelllysate in Betracht gezogen werden, um den Verlust des phosphorylierungsspezifischen Signals zu überprüfen.
• Das vorhergesagte Molekulargewicht von unmodifiziertem RPA2 beträgt 29 kDa; Phosphorylierung oder andere Modifikationen können jedoch die Wanderung beeinflussen. Verwenden Sie geeignete Molekulargewichtsmarker und validieren Sie in Ihrem Proben-System.
• Dieser Antikörper wird für WB und ELISA empfohlen. Für ELISA sollte der Antikörper titriert werden, um die optimale Arbeitsverdünnung zu bestimmen, und eine Kontrolle mit nicht-phosphoryliertem Peptid sollte eingeschlossen werden, um die Spezifität sicherzustellen.
• Eine Kreuzreaktivität mit Ratten-RPA2 wurde berichtet; bei Verwendung von Rattenproben sollte die Leistung unter Ihren experimentellen Bedingungen validiert werden.

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