Phospho-RB-S811 Kaninchen pAb für WB, ELISA - P06400

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: RB-Funktion und Lokalisation

• RB ist ein Tumorsuppressorprotein, das den G1/S-Übergang des Zellzyklus durch Kontrolle der E2F-abhängigen Transkription entscheidend reguliert. Verwandte Referenzen: PMID:10499802
• In seiner hypophosphorylierten Form bindet RB E2F-Transkriptionsfaktoren, blockiert physisch deren Transaktivierungsdomäne und rekrutiert chromatommodifizierende Enzyme, um die Gentranskription zu reprimieren. Verwandte Referenzen: PMID:10499802
• Die Cyclin/CDK-vermittelte Phosphorylierung von RB induziert dessen Dissoziation von E2F, was die Transkription von S-Phasen-Genen und den Zellzyklusfortschritt ermöglicht; die Phosphorylierung durch CDK3/Cyclin-C fördert speziell den G0-G1-Übergang. Verwandte Referenzen: PMID:10499802 PMID:15084261
• RB trägt auch zur Heterochromatinbildung bei, indem es die Histonmethylierung stabilisiert und Histonmethyltransferasen wie SUV39H1 rekrutiert, wodurch die konstitutive Heterochromatinstruktur erhalten bleibt.
• Subzellulär ist RB hauptsächlich im Zellkern lokalisiert, kann aber auch im Zytoplasma nachgewiesen werden.
• Posttranslationelle Modifikationen wie Phosphorylierung, Acetylierung und Methylierung regulieren die Aktivität von RB; virale Onkoproteine (z. B. SV40 großes T-Antigen, HPV E7) können RB-E2F-Komplexe stören, was seine Rolle bei Wirt-Virus-Interaktionen unterstreicht.
• Die Gewebeexpression umfasst die Netzhaut und Vorhaut-Keratinozyten (auf Proteinebene). Verwandte Referenzen: PMID:20940255

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Fügen Sie für die Western Blot-Analyse Phosphataseinhibitoren zu Lysepuffern hinzu, um die Phosphorylierung von RB an Ser811 zu erhalten.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität durch einen Peptid-Wettbewerbsassay mit dem phosphorylierten Immunogenpeptid oder durch Phosphatasebehandlung von Zelllysaten.
• Verwenden Sie Zelllinien oder Gewebeproben mit bekannter RB-Phosphorylierung an Ser811 (z. B. proliferierende Krebszelllinien) als Positivkontrollen.
• Titrieren Sie für ELISA-Anwendungen den Antikörper, um optimale Beschichtungs- und Detektionsbedingungen zu ermitteln, und führen Sie Standardkurvenassays mit Phosphopeptid- und Nichtphospho-Kontrollen durch, um die Spezifität zu bestätigen.

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