Phospho-RB-S795 Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P06400

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation des Retinoblastoma-assoziierten Proteins

• Das Retinoblastoma-assoziierte Protein (RB1, auch bekannt als pRb, p105-Rb, p110-RB1, pp110) ist ein Tumorsuppressorprotein, das beim Menschen vom RB1-Gen kodiert wird.
• RB1 ist ein zentraler Regulator des G1/S-Übergangs des Zellzyklus. In seinem hypophosphorylierten Zustand bindet und inhibiert er E2F-Transkriptionsfaktoren und unterdrückt die Transkription von Genen, die für den Eintritt in die S-Phase benötigt werden. Zugehörige Referenzen: PMID:10499802
• Die Cyclin-abhängige Kinase (CDK)-vermittelte Phosphorylierung von RB1 stört seine Interaktion mit E2Fs, hebt die transkriptionelle Repression auf und ermöglicht den Fortgang des Zellzyklus. Zugehörige Referenzen: PMID:10499802
• RB1 fördert zudem den G0-G1-Übergang durch Phosphorylierung durch CDK3/Cyclin-C, was seine regulatorische Rolle bei Ein- und Austritt aus dem Zellzyklus weiter unterstreicht. Zugehörige Referenzen: PMID:15084261
• Subzellulär ist RB1 überwiegend im Kern lokalisiert, kann aber auch im Zytoplasma gefunden werden – was konsistent mit seinen Funktionen bei der Transkriptionsregulation und Chromatinorganisation ist.
• RB1 ist an der Bildung von Heterochromatin und epigenetischer Stummschaltung beteiligt, indem es Histonmethyltransferasen (z. B. SUV39H1, KMT5B, KMT5C) und Histondeacetylasen rekrutiert und so die Chromatinstruktur erhält.
• Die Gewebeexpression umfasst die Netzhaut und Vorhaut-Keratinozyten, in denen das RB1-Protein nachgewiesen wurde.
• Darüber hinaus wird RB1 von viralen Onkoproteinen wie dem großen T-Antigen von SV40, HPV E7 und Adenovirus E1A targetiert, die RB1-E2F-Komplexe stören, um die virale Replikation zu fördern.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das den Resten um Serin 795 von humanem RB entspricht. Bei der Beurteilung der Spezifität sollten Sie Signale mit denen eines nicht-phosphospezifischen RB-Antikörpers oder mit Phosphatase-behandelten Proben vergleichen.
• Für das Western Blotting ist RB1 ein großes Protein (etwa 106 kDa); sorgen Sie für geeignete Transferbedingungen und verwenden Sie vorgefärbte Marker, um das Molekulargewicht zu bestätigen.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) können Antigen-Retrieval und Blockierungsschritte die Färbung beeinflussen; optimieren Sie diese Parameter in Ihrem spezifischen Gewebesystem.
• Der Antikörper zeigt Kreuzreaktivität mit murinem und Ratten-RB1, was seine Verwendung in Studien mit Nagetierzelllinien oder Geweben ermöglicht; validieren Sie dennoch Expressionslevel und Phosphorylierungsstatus in Ihrem Modell.
• Aufgrund der Anwendung in ELISA stellen Sie sicher, dass das phosphorylierte Epitop im Beschichtungspuffer erhalten bleibt und dass Blockierungsmittel die phosphospezifische Bindung nicht stören.

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