Phospho-Raf1-S338 Kaninchen pAb für WB, IHC-P, ELISA - P04049

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Raf1-Funktion und Lokalisierung

• RAF1 kodiert die Raf-1 Serin/Threonin-Proteinkinase (auch bekannt als c-RAF), einen kritischen Transducer des RAS-RAF-MEK-ERK-Signalwegs, der Zellproliferation, -differenzierung, Apoptose und onkogene Transformation steuert.
• Die Raf1-Aktivierung erfordert Phosphorylierung an Ser338 (und Ser339) durch PAK1, die eine Kinasekaskade auslöst: Raf1 phosphoryliert und aktiviert MEK1/2, die wiederum ERK1/2 phosphorylieren.
• Phosphoryliertes Raf1 (p-Ser338) phosphoryliert auch direkt BAD an Ser75, hemmt dessen pro-apoptotische Funktion und fördert das Zellüberleben.
• Raf1 ist über mehrere zelluläre Kompartimente verteilt – Zytoplasma, Zellmembran, Mitochondrien und Zellkern – und ermöglicht kontextabhängige Signalgebung; mitochondriales Raf1 bindet BCL2, um Apoptose zu blockieren.
• In Skelettmuskeln ist Isoform 1 von Raf1 häufiger als Isoform 2, was auf eine gewebespezifische Regulation hindeutet.
• Mutationen in RAF1 sind mit dem Noonan-Syndrom und hypertropher Kardiomyopathie assoziiert, und das Gen ist ein etabliertes Proto-Onkogen, das in menschlichen Krebserkrankungen häufig hyperaktiviert ist.
• Wichtige posttranslationale Modifikationen umfassen Serin/Threonin/Tyrosin-Phosphorylierung, Methylierung und Ubiquitinierung, die die Raf1-Aktivität und -Stabilität fein abstimmen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um Ser338; daher erkennt der Antikörper Raf1 spezifisch nur, wenn es an dieser Stelle phosphoryliert ist. Für Western Blotting sollten Phosphatase-Inhibitoren in den Lysepuffern enthalten sein, und die Behandlung von Proben mit EGF oder Serum zur Stimulierung der Phosphorylierung sollte in Betracht gezogen werden.
• Für IHC-P sollte die Phospho-Spezifität durch Vergleich der Färbung mit und ohne Phosphatase-Behandlung überprüft werden; die Antigen-Retrieval-Bedingungen müssen möglicherweise für phosphorylierte Epitope optimiert werden.
• Dieser Antikörper ist für WB, IHC-P und ELISA validiert. Bei der Durchführung von quantitativem ELISA sollten geeignete Phospho-Peptid- und Nicht-Phospho-Peptid-Kontrollen zur Bestätigung der Spezifität verwendet werden.
• Kreuzreagiert laut Herstellerangaben mit humanem, murinem und Ratten-Raf1; die Leistung sollte im gewünschten Probensystem validiert werden, um eine konsistente Performance sicherzustellen.

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