Phospho-PRKCQ-T538 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q04759

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: PRKCQ-Funktion und Lokalisierung

• PRKCQ (Proteinkinase C Theta-Typ, nPKC-theta) ist eine calciumunabhängige, phospholipid- und diacylglycerolabhängige Serin/Threonin-Proteinkinase, die nicht-redundante Rollen in der T-Zell-Rezeptor (TCR)-Signalübertragung spielt.
• In TCR-CD3/CD28-kostimulierten T-Zellen ist sie für die Aktivierung von NF-kappa-B und JUN, essentiell für die IL2-Produktion, erforderlich und beteiligt sich an der NFATC1/NFATC2-Transaktivierung. Verwandte Referenzen: PMID:21964608
• Sie vermittelt die Aktivierung des kanonischen NF-kB-Signalwegs durch Phosphorylierung von CARD11, was zur Rekrutierung des BCL10-MALT1-Komplexes und zur IKK-Aktivierung führt.
• PRKCQ ist entscheidend für die Differenzierung von T-Helferzellen, notwendig für die Th2- und Th17-Zellentwicklung, und spielt eine geringere Rolle in der Th1-Antwort; sie liefert auch Überlebenssignale durch Phosphorylierung von BAD und Hochregulierung von BCL-XL.
• Über T-Zellen hinaus reguliert sie in Thrombozyten die Signaltransduktion stromabwärts von ITGA2B und anderen Rezeptoren und spielt eine positive Rolle im "Outside-in"-Signaling und der Granulasekretion.
• Sie könnte die inhibitorischen Effekte freier Fettsäuren auf die Insulin-Signalübertragung vermitteln, indem sie IRS1 phosphoryliert und so die PI3K/AKT-Signalwegaktivierung blockiert.
• PRKCQ phosphoryliert CCDC88A/GIV und hemmt dessen Guanine-Nucleotide-Exchange-Factor-Aktivität. Verwandte Referenzen: PMID:23509302
• Sie aktiviert auch LRRK1, welches RAB-Proteine phosphoryliert, die am intrazellulären Transport beteiligt sind. Verwandte Referenzen: PMID:36040231
• Subzelluläre Lokalisation: Zytoplasma und Zellmembran.
• Gewebespezifität: Exprimiert in Skelettmuskel, T-Zellen, megakaryoblastischen Zellen und Thrombozyten.
• KEYWORDS zeigen an, dass es sich um ein Phosphoprotein handelt, das an Immunität und Entzündungsreaktion beteiligt ist, mit Zinkfinger- und Kinasedomänen.
• Das Protein unterliegt alternativem Spleißen und hat Isopeptidbindungs- und Ubl-Konjugationsmodifikationen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen-Design zielt auf die Phosphorylierung an Thr538 ab. Um diese labile Modifikation zu erhalten, sollten Phosphataseinhibitoren in Lysepuffer enthalten sein und Gefrier-Tau-Zyklen der Proben vermieden werden.
• Für Western Blotting sollte ein mildes Blockierungsmittel (z.B. 5% BSA) verwendet werden, um unspezifische Bindung zu reduzieren; die Antikörperspezifität sollte durch Behandlung der Proben mit Lambda-Phosphatase vor der Elektrophorese bestätigt werden.
• Eine Validierung in einem relevanten zellulären Kontext wird empfohlen: In humanen T-Zelllinien (z.B. Jurkat), die über Anti-CD3/CD28 stimuliert wurden, sollte eine Bande bei ~82 kDa beobachtet werden, was auf eine PRKCQ-Phosphorylierung hinweist.
• Für den ELISA-basierten Nachweis kann ein Phosphopeptid, das die T538-Stelle abdeckt, als positive Kontrolle dienen; die Kreuzreaktivität mit dem unphosphorylierten Peptid sollte bewertet werden.

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