Phospho-POLR2A CTD-S5 Kaninchen-mAb für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P24928

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von POLR2A (RPB1)

• POLR2A kodiert die DNA-abhängige RNA-Polymerase II Untereinheit RPB1, die größte katalytische Untereinheit der Pol II, auch bekannt als RPB1, hRPB220 und POLR2 (UniProt P24928).
• Als zentrale katalytische Komponente der Pol II synthetisiert RPB1 mRNA-Vorläufer und nicht-kodierende RNAs während des Transkriptionszyklus aus Initiation, Elongation und Termination. Zugehörige Referenzen: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596 PMID:28108474
• Die C-terminale Domäne (CTD) besteht aus 52 Heptapeptid-Wiederholungen und unterliegt einer dynamischen Phosphorylierung: Die Ser5-Phosphorylierung fördert den Promotor-Escape, während die Ser2-Phosphorylierung das Pause-Release und die Elongation ermöglicht. Zugehörige Referenzen: PMID:24207025 PMID:26124092
• RPB1 lokalisiert vorwiegend im Zellkern, mit zusätzlichem Vorkommen im Zytoplasma und auf Chromosomen während der Transkription.
• Posttranslationale Modifikationen der CTD umfassen Acetylierung, Methylierung und Ubiquitinierung, welche die Transkriptionsinitiation und -elongation modulieren, insbesondere bei wachstumsfaktorinduzierten Genen.
• RPB1 besitzt zudem RNA-abhängige RNA-Polymerase-Aktivität, die an der Verlängerung nicht-kodierender RNAs und an Wirt-Virus-Interaktionen, wie der Replikation des Hepatitis-Delta-Virus, beteiligt ist.
• Mutationen in POLR2A werden mit neurologischen Entwicklungsstörungen und geistiger Behinderung in Verbindung gebracht (UniProt-Stichwort: Geistige Behinderung, Krankheitsvariante).

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phospho-Peptid, das den Resten um Ser5 der POLR2A CTD entspricht, um die Spezifität für die phosphorylierte Form zu gewährleisten. Validieren Sie die Antikörperspezifität in Ihrem Assay-System durch Phosphatase-Behandlung oder Blockierung mit nicht-phosphoryliertem Peptid.
• Für Western Blot ist eine Bande bei ca. 217 kDa zu erwarten; ziehen Sie die Verwendung eines geeigneten Gel-Prozentsatzes und entsprechende Transferbedingungen für Proteine mit hohem Molekulargewicht in Betracht.
• Der Antikörper ist für IHC-P und IF/ICC validiert; optimieren Sie die Antigen-Retrieval- und Permeabilisierungsbedingungen basierend auf dem Gewebe- oder Zelltyp.
• Die Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte deutet auf konservierte Sequenzen in diesen Spezies hin; bestätigen Sie die Eignung in Ihrem Versuchsmodell.

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