Phospho-POLR2A CTD- S2/S5 Kaninchen pAb - P24928

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von POLR2A

• DNA-abhängige RNA-Polymerase II-Untereinheit RPB1 ist die katalytische Kernkomponente der RNA-Polymerase II (Pol II), verantwortlich für die Synthese von mRNA-Vorläufern und vielen funktionellen nichtkodierenden RNAs. Zugehörige Referenzen: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596
• Der Pol-II-Transkriptionszyklus durchläuft die Stadien Initiation, Elongation und Termination, wobei das Enzym zusammen mit der zweitgrößten Untereinheit POLR2B/RPB2 das aktive Zentrum bildet. Zugehörige Referenzen: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474
• POLR2A fügt Nukleotide über einen Mg(2+)-abhängigen Mechanismus an und besitzt eine 3' -> 5' Exonuklease-Korrekturleseaktivität, um falsch eingebaute Ribonukleotide zu korrigieren. Zugehörige Referenzen: PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• Die einzigartige C-terminale Domäne (CTD), die aus 52 Heptapeptid-Wiederholungen besteht, dient als Plattform für die Transkriptionsregulation; die Phosphorylierung an Ser5 vermittelt das Promotor-Entkommen, während die Ser2-Phosphorylierung für die Pausenfreisetzung und die Prä-mRNA-Prozessierung erforderlich ist. Zugehörige Referenzen: PMID:24207025, PMID:26124092
• CTD-Methylierung und -Acetylierung regulieren ebenfalls die Genexpression: Acetylierung ist mit der Induktion von Sofort-Früh-Genen verbunden, während Methylierung die Expression von Zielgenen unterdrückt.
• Die subzelluläre Lokalisation umfasst Kern, Zytoplasma und Chromosom, was mit seinen Rollen bei der Transkription und RNA-Prozessierung übereinstimmt.
• POLR2A fungiert auch als RNA-abhängige RNA-Polymerase, die nichtkodierende RNAs verlängert und als Replikase für das Hepatitis-Delta-Virus wirkt.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das um die S2/S5-Phosphorylierungsstellen der POLR2A-CTD-Wiederholung YSPTSPS entworfen wurde, was darauf hindeutet, dass der Antikörper sowohl phosphoryliertes Ser2 als auch Ser5 erkennen kann.
• Für den Western Blot empfehlen sich aufgrund des hohen Molekulargewichts (~217 kDa) SDS-PAGE-Gele mit niedrigem Prozentsatz (z. B. 6-8%) und verlängerte Transferzeiten; die Zugabe von Phosphataseinhibitoren zum Lysepuffer wird empfohlen, um die Phosphorylierung zu erhalten.
• Die Spezifität kann durch Behandlung der Proben mit Lambda-Phosphatase oder durch Peptid-Konkurrenz-Assays überprüft werden.
• Verwenden Sie im ELISA mit Phosphopeptid beschichtete Platten und bestätigen Sie die Reaktivität mit Kontrollen aus nicht-phosphoryliertem Peptid, um die Phosphoselektivität zu bewerten.
• Dieser Antikörper ist für menschliche Proben vorgesehen; Kreuzreaktivität mit anderen Spezies wurde nicht berichtet, daher wird eine Validierung im jeweiligen Probensystem empfohlen.

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