Phospho-PLN-S16 Kaninchen pAb für WB und ELISA - P26678

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Phospholamban

• Phospholamban (PLN) ist ein 6,1 kDa transmembranäres phosphoryliertes Protein, das die SERCA2 Ca2+-ATPase im kardialen sarkoplasmatischen Retikulum reversibel hemmt, indem es die scheinbare Ca2+-Affinität der Pumpe reduziert und dadurch die kardiale Kontraktilität und Relaxation reguliert (PubMed:28890335). Verwandte Referenzen: PMID:28890335
• PLN bindet bevorzugt an die ATP-gebundene E1-Konformation von SERCA2, die bei niedrigen diastolischen Ca2+-Konzentrationen vorherrscht, und stört die allosterische Aktivierung durch ATP, um die Ca2+-Wiederaufnahme während der Diastole zu verlangsamen.
• Über SERCA2 hinaus hemmt PLN auch SERCA3 und wurde mit der Kalziumhomöostase in länglichen Spermatiden und dem thalamischen retikulären Kern in Verbindung gebracht, was möglicherweise die Keimzellendifferenzierung und Schlaf-Wach-Verhalten beeinflusst.
• Die Phosphorylierung von PLN an Ser16 (und Thr17) durch Proteinkinasen wie PKA und CaMKII kehrt die SERCA2-Hemmung um und dient als kritischer regulatorischer Knotenpunkt in der β-adrenergen Signalübertragung und der kardialen Kontraktilität.
• Subzellulär befindet sich PLN in der sarkoplasmatischen/endoplasmatischen Retikulummembran und der mitochondrialen Membran, wo es seine regulatorischen Funktionen in Kalzium-handhabenden Organellen verankert.
• PLN wird überwiegend im Herzmuskel exprimiert; Mutationen in PLN verursachen erbliche Kardiomyopathien, einschließlich dilatativer Kardiomyopathie (CMD1P) und hypertensiver Kardiomyopathie (CMH18).
• Das Protein erfährt mehrere kovalente Modifikationen – Palmitoylierung, Acetylierung und Phosphorylierung –, die seinen oligomeren Zustand, seine Membranverankerung und seine regulatorische Aktivität beeinflussen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das den Aminosäureresten um Ser16 von menschlichem PLN entspricht; dieses Design reichert Antikörper an, die das phosphorylierte Epitop erkennen. Für ELISA und Western Blot sollten nicht-phosphorylierte Peptide oder lysierte Proben nach Phosphatasebehandlung als Negativkontrollen verwendet werden, um die Phosphorylierungsspezifität zu bestätigen.
• Aufgrund des geringen Molekulargewichts von PLN (~6 kDa) kann die Standard-SDS-PAGE das Protein möglicherweise nicht effizient auflösen; für den Western Blot werden Gele mit hoher Konzentration (z. B. 15–20 %) oder Tricin-SDS-PAGE empfohlen.
• Der Antikörper zeigt die angegebene Kreuzreaktivität mit PLN von Maus und Ratte; validieren Sie die Detektion von endogen phosphoryliertem PLN in Herzgewebelysaten dieser Spezies, da PLN im Herzen stark exprimiert wird.
• Für ELISA kann die kaninchenpolyclonale Natur eine empfindliche Erfassung/Detektion ermöglichen; die Chargen-zu-Charge-Konsistenz sollte jedoch für quantitative Assays überprüft werden.
• Da die Phosphorylierung von PLN dynamisch reguliert wird, ist eine geeignete Probenvorbereitung mit Phosphatase-Inhibitoren unerlässlich, um das Phospho-S16-Signal zu erhalten.

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